Приложение на 3D принтиране и ИКТ за зелени продукти и процеси

ОСНОВНО НИВО

3D принтирането е технология, която използва предварително зададени виртуални инструкции с цел да създаде физически (материален) триизмерен обект.

Съдържание

 

3D принтиране – основни принципи и механизъм

Дефиниции

3D принтирането е технология, която използва предварително зададени виртуални инструкции с цел да създаде физически (материален) триизмерен обект. Това се постига чрез нанасяне на множество последователни слоеве материал един върху друг. Всеки слой представлява напречен пререз на обекта, който отразява строежа му на определено ниво по оста z. Отделните слоеве могат да бъдат еднакви помежду си (когато структурата на обекта не се променя между два слоя) или различни (когато се променя).

Илюстрация на основните принципи на 3D принтирането може да се направи с приготвлението на торта (Фиг. 1). Както тортата се изгражда от последователно нареждане на платки една върху друга и слепването им с крем, така и 3D-принтираните обекти са изградени от множество слоеве материал, които прилепват плътно един към друг. Разликата е в това, че  слоевете при 3D принтирането са много тънки  – с дебелина средно около 1/5 от милиметъра.

A.

B.

Фигура 1. Илюстрация на принципа на 3D принтирането – създаване на материални обекти чрез наслояване на множество тънки слоеве.
A – Вътрешна структура на торта, направена чрез нанасяне на последователни слоеве. Източник: Caroline's Cakes – Own work, CC BY-SA 3.0,

https://commons.wikimedia.org/w/index.php?curid=12799030
B – Триизмерна структура от шоколад, създадена чрез 3D принтиране. Източник: FM1418, CC BY-SA 4.0 <https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0>, via Wikimedia Commons

3D принтирането наподобява, както по технология, така и по използвани материали, на рутинното 2D принтиране. И в двата случая се използва течен, полутечен или прахообразен материал – мастило, което се наслоява върху основа (при 2D-принтирането – върху хартия или плака, при 3D-принтирането – върху движеща се платформа). Разликата се състои в това, че 2D печатът е  технология за изобразяване на триизмерни обекти в двумерно пространство. Той не може да пресъздаде напълно третото измерение на физическите обекти – дълбочината, поради което използва перспектива и светлосянка, за да създаде впечатление за дълбочина. 3D принтирането, от своя страна, създава реални триизмерни обекти. Тези обекти могат да имат огромно разнообразие от приложения, започвайки от бързо и икономично създаване на прототипи за целите на научно-изследователската и развойната дейност; пилотно или масово производство на различни изделия за всекидневна (напр. детски играчки, прибори за хранене, инструменти за бита и пр.) или специална употреба (напр. детайли и части за машини и съоръжения); кулинарни изделия по индивидуална поръчка (каквато е, например, шоколадовата фигура на фиг. 1Б); имплантируеми медицински изделия за целите на регенеративната медицина; и стигайки до нови изразни форми в изкуството.

Един базов модел настолен 3D принтер с комплектната му компютърна конфигурация е представен на фиг. 2.

Фигура 2. LulzBot TAZ (производство на американската компания FAME 3D със седалище гр. Фарго, Северна Дакота. Основава се на процес, наречен FDM (fused deposition modelling) и използва софтуер с отворен код. Източник: Ochs, J. – College, CC BY 4.0 https://commons.wikimedia.org/w/index.php?curid=59898086

Тъй като 3D принтирането се извършва чрез последователно добавяне на слоеве,  като синоним понякога се използват термините „адитивна технология“ или „адитивно производство“. Материалът, който се наслоява  при 3D принтирането често се нарича „3D мастило“, по алюзия с мастилото при рутинния 2D печат върху хартия. Броят на нанесените слоеве може да бъде много различен, в зависимост от използвания процес и от големината на принтирания обект.

Вътрешността на 3D принтирания обект може да бъде плътна, но може и да съдържа всякакви по вид и размери кухини. Параметрите на вътрешната структура на 3D принтирания обект зависят от предварително зададената информация за всеки слой. Един слой представлява един напречен пререз на обекта на определено ниво по оста z (съответстваща на измерението височина) на обекта. Ако се зададат различни параметри на всеки слой, може да се изгради обект с много сложна вътрешна структура, като ограничения в това се налагат  само от конкретния процес за принтиране и използвания материал.

От линка може да се види кратък видеофайл, представящ процеса на 3D принтиране:

https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/e/ed/Robot_3D_print_timelapse_on_RepRapPro_Fisher.gif

Най-често използвания в момента процес за  3D принтиране е FDM (fused deposition modelling). Той може да използва различни видове леснодостъпни материали, обектите рядко имат нужда от сериозна постпроизводствена обработка и не формира големи производствени разходи. Разработени  са и се използват  още много други процеси за 3D принтиране, всеки от които има своите предимства и недостатъци.

Исторически преглед на зараждането на концепцията за 3D принтиране и първи стъпки в областта

В литературата обикновено се посочва, че концепцията  за създаване на физически обекти от аморфна материя по предварително известен виртуален модел и без директна обработка от човешки ръце датира най-рано от 50-те години на ХХ век. По-точно, за „баща“ на идеята за 3D принтирането най-често се счита американският писател Реймънд Джоунс, който през 1950 г. публикува в научнофантастичното списаниe „Astounding” краткия разказ “Молекулярен спрей“. Конкретно, в разказа става дума за създаване на реални, годни за използване инженерни инструменти от екструзия на аморфно вещество (молекулярен спрей), следвайки инструкции, записани на информационен носител. Колкото и близко да е била идеята на Реймънд Джоунс  до днешното 3D принтиране, тя в никой случай не е нова, тъй като около петдесет години преди това английският писател Ръдиард Киплинг описва в детската си приказка „Как камилата получи своята гърбица“ създаването на триизмерен обект чрез кондензация на материя, направлявано от виртуални инструкции.

Чие е първопроходството в процеса на 3D принтиране, обаче, е несъмнено. То принадлежи на Йоханес Готвалд, който създава и патентова в САЩ през 70-те години на ХХ век своето „Записващо устройство с течно металическо мастило“ (Liquid metal recorder, патентен номер US3596285A). „Записващото устройство“ на Готвалд използвало метално мастило, течно при висока температура, което се изхвърляло под налягане и се оставяло да застине върху твърда повърхност. При нагряване на повърхността, мастилото се втечнявало отново и можело да се отстрани от повърхността, за да може тя да се използва повторно. Както се случва нерядко с новите концепции, патентът на Готвалд бил регистриран, но на откритието му никой не обърнал особено внимание.

Няколко години по-късно, през 1980 г., японецът Хидео Кодама подава документи за регистрация на патент за „Стереоскопичен уред за създаване на фигури“ (Stereoscopic figure drawing device, патентен номер (JP S56144478 A)). Неговото изобретение се основовало на селективно облъчване с ултравиолетова светлина на  UV-чувствителен полимер, като местата и времето на облъчване се контролирали от предварително зададен виртуален модел. Както и Готвалд преди него,  и Кодама не успял да привлече внимание към изобретението си. Въпреки че публикувал резултатите си през 1980 г. в реномирано научно списание [1],  проектът на Кодама за стереоскопичния уред не получил финансиране.

Четири години по-късно, подобна съдба сполетяла и патента за процеса „стереолитография“ на французите Льо Меуте, де Уит и Андре. По техни собствени думи, споделени в интервю от 2014 г., финансиране на проекта им не било осигурено, тъй като „изобретението им нямало бъдеще от гледна точка на бизнес реализацията си“ [http://www.primante3d.com/inventeur/].

Приблизително по същото време, обаче, през 1985 г., американецът Уилям Мастърс регистрира първия от множеството си патенти в областта, която впоследствие бива наречена „3D принтиране“ – „Компютърно управлявана система и процес за автоматично производство“, патентен номер (US 4665492).

Само две години по-късно, през 1987 г., американецът Чарлз Хъл регистрира патент за своя „Апарат за производство на стереолитографии“ (патентен номер US4575330A), основава своя компания и представя на пазара първия 3D принтер (модел SLA-1, работещ с процеса стереолитография).

Патентът за най-често използвания в момента процес на 3D принтиране – FDM  – е бил регистриран през 1989 г. в САЩ от Скот Кръмп (патентен номер US5340433A). Първият 3D принтер, основан на тази технология, е бил произведен през 1992 г. На Хъл дължим също така и най-кратката и точна дефиниция на 3D принтирането досега, а именно: „Система за производство на триизмерни обекти чрез създаване на набор от напречни прерези“. Тази дефиниция се съдържа в описанието на неговия патент „Метод за производство на триизмерни обекти чрез стереолитография“ (патентен номер US5174943A).

Предимства и недостатъци на 3D принтирането като производствена технология

Предимствата на 3D принтирането в сравнение с традиционните технологии за производство на различни обекти са многобройни. По-важните от тях са описани накратко по-долу:

  1. За разлика от традиционните производствени технологии, обектът, произведен чрез 3D принтиране може да има много сложна структура – както външна, така и вътрешна.
  2. В дизайна могат лесно и по всяко време преди началото на принтирането да се въвеждат всякакви промени и модификации.

За разлика от традиционните производствени технологии, където, ако се налагат промени в продукта, трябва да се въвеждат хардуерни промени (в процеса или в апарата, който го изпълнява), при 3D принтирането промените са само софтуерни – само във файловете, които се подават на принтера.

  1. Лесно и бързо може да се адаптира към нуждите на конкретен потребител.

Дизайнът на 3D-принтираните обекти може лесно да се изменя в зависимост от желанието на потребителя. По този начин бързо могат да се получат серия прототипи с малки разлики в дизайна и да се избере най-подходящия за конкретната цел.

  1. Произведените чрез 3D обекти обикновено са от пластмаса, което означава, че са здрави, издържливи на механични напрежения и, в същото време, много леки. Това, разбира се, зависи от вида на материала (различните пластмаси имат различни качества, а и освен пластмаса могат да се използват и други материали, като например гипс, метал, метални сплави и пр.).
  2. Бързина на производствения процес

Това важи основно за производство на обекти с не много сложна структура и в ниска скала (не повече от няколкостотин до няколко хиляди копия).  3D-принтирането на обекти със сложен дизайн и/или множество копия, както и много големи по размери обекти могат да отнемат повече време.

  1. Сравнително ниски загуби на материал (фири) в сравнение с произведените с традиционни производствени технологии.

Тъй като при 3D-принтирането обектите или техните части не се изсичат или изрязват от блокове материал, а вътрешните им кухини не се получават чрез пробиване или издълбаване,  загубите на материал са пренебрежимо ниски. Изключение от това правят праховите методи за 3D-принтиране, при които излишъкът от материал не може да се използва и се губи при производството.

  1. Често обектите, получени чрез 3D-принтиране имат по-ниска себестойност от тези, получени чрез традиционните производствени технологии. Това, обаче, зависи от конкретната технология и от материала, който се използва.
  2. Достъпът на потребителите (изследователи, индустрия, любители и пр.) до 3D принтери и използването на технологията е по-лесно в сравнение с достъпа до традиционните производствени технологии, машини и съоръжения. Разбира се, в повечето случаи един 3D-принтер обслужва много потребители, така че се образува опашка от чакащи изпълнение поръчки. Колко ще бъде времето за чакане за изпълнение на конкретната поръчка зависи от модела на принтера; използваният процес; какъв е типът на институцията, която го предоставя за ползване (търговска компания, научно-изследователска организация и пр.) и какви поръчки в момента се изпълняват на конкретния 3D принтер.
  3. 3D принтирането може да генерира по-ниско ниво на замърсяване в сравнение с традиционнните производствени технологии.

Това зависи от вида на използвания материал, конкретния процес, колко интензивно се използва 3D принтерът и доколко е адекватна техническата му поддръжка. Обекти, които по някаква причина се бракуват или изхвърлят след като приключи използването им, отпадните води от постпроизводствената обработка и излъчването на малки прахови частици при праховите технологии представляват сериозен риск за замърсяване на околната среда и трябва да се взимат специални мерки за тяхното намаляване или обезвреждане.

  1. 3D принтирането има голям потенциал за употреба в репаративната и регенеративната медицина (т. нар. 3D биопринтиране).

Усилено се разработват нови материали за целите на репаративната и регенеративната медицина и, специфично, имплантологията. Счита се, че доскорошният подход на  използване  на имплантируеми материали, които са физично, химично и биологично „инертни“ по отношение на живата тъкан, в  която се намират, е морално остарял. Такива материали все още се използват, доколкото в някои случаи е напълно достатъчно да се осигури стабилно укрепване на биологични тъкани, чиито естествени подпорни структури са били увредени или свързване на елементи от структури, чиято цялост е била нарушена. Новата концепция в имплантологията постулира, че ако имплантируемият материал наподобява естествената извънклетъчна среда, той има потенциала да се интегрира  напълно в живата тъкан и, съответно, да участва пълноценно във възстановяването на структурата и функциите й. Подобни материали се разработват и изпитват отдавна. Те могат да бъдат от изкуствен произход, но по структура и взаимодействие с живите клетки да напомнят живата тъкан (т.нар. биомимики). Едно от много обещаващите потенциални приложения на 3D принтирането  е осигуряване на оптимална пространствена структура на нови материали, така че те да бъдат колонизирани лесно и бързо с живи клетки от съседните интактни тъкани. Друго, също много бързо развиващо се направление на 3D-биопринтирането е разработването на изкуствено създадена жива тъкан, чрез използване на съдържащи живи клетки „биомастило“, което контролирано се нанася така, че да се постигне оптимална тъканна архитектоника.  По този начин в бъдеще би било възможно създаване на функциониращи тъкани и органи за целите на репаративната и регенеративнага медицина.

3D принтирането, разбира се, има и своите ограничения и недостатъци в сравнение с традиционните производствени методи. Някои от тях могат да бъдат:

  1. Проблеми, свързани с грешки в дизайна на обекта.

Дизайнът на 3D принтираните обекти може да бъде много сложен и разнообразен. Той, обаче, се извършва предварително, всички промени се записват на файл и този файл се подава съм принтера. Дори и дребна грешка в използвания за печат файл може да доведе до сериозни недостатъци на получените от него обекти. Някои от тези грешки  могат да бъдат лесно и бързо минимизирани или поправени  в хода на постпроизводствената обработка на принтираните обекти (постпроцесинг). Това, обаче, удължава времето за получаване от потребителя на готовия обект. Други грешки в дизайна могат да доведат до принтиране на негоден за употреба обект, или такъв с променени характеристики (напр. деформиран, с намалена механична устойчивост и пр.).

  1. Ограничения, свързани с вида на изполвания материал.

Повечето 3D принтери използват като мастило някакъв вид пластмаса. Тъй като пластмасите се разграждат бавно, обектите, произведени от пластмаса и изхвърлени във външната среда  ще представляват замърсители. При някои процеси самият печатен процес и построизводствената обработка генерират прахови частици, които замърсяват средата и могат да имат канцерогенен потенциал, ако бъдат вдишани или погълнати. Във фармацевтичната промишленост и при 3D биопринтирането ограниченията, свързани с материала могат да бъдат критично важни.

  1. Ограничения, свързани с размера на обекта.

Обикновено 3D-принтирането на даден обект се извършва едноетапно, независимо от това колко е сложна структурата му. Ак обектът е много голям, обаче, може да се наложи да бъдат изпринтени отделни негови части, които впоследствие да бъдат сглобени. Това увеличава и времетраенето на изработката на обекта, и цената  му.

  1. Възможно е в хода на използването му на получения обект,   характеристиките му да се променят.

Това важи основно за обекти, които са създадени с помощта на светочувствителен материал или се сглобяват от отделни части, както и  за обекти, съдържащи части, които са подложени на голям механичен стрес, както и движещи се и триещи се части. Светочувствителните полимери могат да се изкривят или да се начупят при съхранение на обекта на светло. Под въздействието на механична сила, отделните слоеве в обектите може да се отделят един от друг (разслояване).   Получените от  някои процеси на 3D принтиране (например FDM) и обектите с много сложна структура могат даса крехки и чупливи.

  1. Обектите, получени чрез 3D принтиране често имат нужда от постпроизводствена обработка.

Това увеличава времетраенето за изпълнение на поръчката и разходите по производството на обекта.

  1. При 3D принтирането, разходите за производство и постпроизводствена обработка не намаляват съществено с увеличаване на броя на произведените обекти.

При традиционните производствени технологии, използването на пълния капацитет на машината или поточната линия обикновено води до намаляване на производствените разходи, съотнесени към единица произведен продукт. При 3D принтирането увеличаването на натоварването на принтера не понижава осезаемо производствените разходи.

  1. Проблеми, свързани с нарушение на авторски права.

Такива може да има както по отношение на дизайна на произведените обекти, така и по отношение на дизайна на файловете, използвани за 3D принтиране, процеса, софтуера и машините, използвани в конкретния случай.

  1. Етични проблеми, свързани с биопринтирането на жива тъкан и нейното използване.
  2. Въвеждането на технологиите на 3D принтиране биха могли да доведат, по индиректен начин, до увеличаване на безработицата поради намаляване на нуждите от работна ръка в традиционните производства.

Основни видове процеси и използвани материали в 3D принтирането

Видове процеси за 3D принтиране

Всички съществуващи в момента процеси за 3D принтиране имат няколко общи черти: обектите се изграждат чрез последователно отлагане на тънки слоеве материал върху подложка; всеки слой представлява напречен пререз на обекта на дадено ниво по оста z; процесът се контролира електронно, чрез един или повече компютри, които в най-общия случай трябва да разполагат със софтуер за създаване и корекция на  файлове, съдържащи информацията за дизайна на обекта; за обработка на информацията в тези файлове и за самия процес на принтиране.

По-долу накратко са  представени някои от най-често използваните процеси в 3D принтирането и материалите, които те могат да използват. Разбира се, съществуват и други, които не са включени в това изложение.

  • Екструзионни процеси – работят с течно или полутечно мастило: SLA, FDM, EXT, PolyJet

Основани са на отлагане на последователни слоеве течно мастило (с по-нисък или по-висок вискозитет, в зависимост от конкретния процес), което е топло- или светлочувствително. Отделните слоеве прилепват един към друг след нагряване или облъчване със светлина с определена дължина на вълната (генерирана от светлинен източник – UV лампа или лазер). Ако е с течна или полутечна консистенция, мастилото се изцежда (най-често се използва терминът „екструдира“) от главата на принтера, а ако е по-вискозно, се подава под формата на нишка, която постепенно се развива от ролка или макара.

  • Стереолитография (SLA)

3D принтирането чрез стереолитография е исторически най-старият процес. Най-общо казано, стереолитографията представлява създаване на обекти чрез селективна фотополимеризация в реално време на фоточувствителен материал, който се наслоява контролирано върху движеща се платформа. Дължината на вълната на светлината, която се използва е най-често в UV-диапазона, но е възможно да се използва и светлина с друга дължина на вълната в зависимост от използвания материал. Полимеризацията се извършва по радикалов механизъм.

Тъй като облъчването се извършва селективно, някои части на изграждания обект, които в даден момент още не са подложени на облъчване, могат да се огънат и да компрометират целостта на цялата структура. Прилепването на отделните слоеве един към друг се извършва чрез кръстосана полимеризация на молекули от съседни слоеве една към друга. Това отнема известно време и достигането на крайната здравина на обекта може да се забави и след завършването му. Поради това, може да се наложи да се поставят опорни структури на стратегически избрани места в обекта по време на принтирането му, за да се запази зададеният дизайн.  Тези структури се отстраняват след приключването на процеса. Накрая може да се извърши постпроизводствена обработка на завършения обект за подобряване на механичните му качества и външния вид.

На фиг. 3 е представен стереолитографски принтиран модел на вътрешноото ухо на човека.

Фигура 3. Получен чрез SLA принтиране модел на костния охлюв на вътрешното ухо на човека. Източник: Didier Descouens, CC BY-SA 4.0 <https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0>, via Wikimedia Commons

Неполимеризиралото мастило за SLA обикновено е с течна консистенция. Мономерът обикновено е на основа епоксид или акрил, но се използват и други, като триметиленкарбонат, поликапролактон и полилактид [2-4]. Получените чрез използване на тези материали обекти обикновено имат значителна твърдост, но са сравнително крехки и чупливи. Поради това, SLA най-често се използва за бързо прототипиране и в научно-изследователската дейност (напр. за създаване на твърди подложки за тъканно култивиране). Процесът не е подходящ за производство на обекти, които трябва да имат значителна механична здравина или да са издържливи. Поради естеството на процеса, обектите, произведени чрез стереолитография са чувствителни съм светлината и могат да се изменят значително при продължително съхранение и  дори и да се разпаднат, ако са били изложени продължително време на светлина.

Обикновено SLA не включва използване на разтворители, така че този процес е свързан с нисък риск за изпускане на газообразни замърсители в атмосферата. Тъй като обектите са чупливи, обаче, остатъците от обекти могат сериозно да замърсят околната среда. Тъй като се използва UV светлина за индукция на полимеризация, съществува вътрешно присъщ на процеса риск за случайно излагане на оператора на вредно лъчение; както и риск от увреждане на околните повърхности и предмети. Някои от мастилата, използвани в стереолитографията могат да имат висок канцерогенен и невротоксичен потенциал. Не на последно място, използването на UV води до образуване на озон, което е допълнителен риск за работещите в такива производства.

  • Fused deposition modelling (FDM, понякога се обозначава и като fused filament fabrication – FFF)

FDM се основава на контролирана екструзия на нишка от термопластично „мастило“ от нагорещената глава на принтера. Обектът се изгражда върху движеща се платформа, която се смъква контролирано надолу паралелно с нарастването на височината на структурата, за да могат да се добавят следващи слоеве (фиг. 4).

Фигура 4. Базов принцип на работа на 3D принтерите, основани на процеса FDM. Източник: By Gringer – Own work, CC0, https://commons.wikimedia.org/w/index.php?curid=73614647.

В момента на екструзия мастилото е нагрято малко над точката си на топене и е с полутечна консистенция. След нанасянето си мастилото застива и образува предварително зададената форма на съответния слой. Последователните слоеве прилепват един към друг докато мастилото е току-що нанесено и все още с полутечна консистенция. Мастилената нишка се подава автоматично от развиваща се ролка.

Минималната дебелина  на единичния слой при процеса  FDM е 100 μm. Най-често използваните материали са акрилонитрилбутадиенстирен  (ABS), полилактид (PLA) и полиетилентерефталатгликол (PETG). Използват се, макар и по-рядко, и други, напр. полифенилов етер (PPE), полиуретан (PU), полифенилсулфон (PPSP), поликарбонат (PC), полиетеримид (PEI), полиетеркетон (PEEK) и полиамид (PA, известен с популярното си име найлон) [4,5].  Възможно е като мастило при FDM да се използва и поливинилов алкохол (PVA). Тъй като той, обаче,  е водоразтворим,  основното му приложение е за изработване на подпорни структури, които се използват в хода на създаването на 3D принтирани обекти от някакъв друг материал и след завършването на последните се отстраняват.

Един често използван в Европа модел FDM принтер е показан на фиг. 5.

Фигура 5. PRUSA i3 MK2 FDM принтер (Prusa Research, Прага, Чехия) със заредена ролка от мастило и завършен 3D принтиран обект Източник: Wikimedia Commons, http://reprap.org/wiki/File:Prusai3-MK2.jpg.

При FDM принтирането може да се използва термопластично мастило не само под формата на нишка, но  и на  гранули или пръчици. Някои FDM  принтери позволяват и „студена“вариация на FDM процеса, която не използва термопластично мастило (подобен на процеса EXT – виж по-долу). В този случай материалът за печатане е с кашеобразна или пастообразна консистенция [6].

FDM e относително бърз, удобен и евтин метод за 3D принтиране и поради това е много популярен, особено за целите на създаването на модели и бързо прототипиране. Използва се както в научно-изследователската дейност и индустрията (бързо прототипиране – напр. в инженерството; производство на машинни части и пр.), така и от любители (колекционери, създатели на различни малки модели и фигурки); в областта на образованието (различни модели и прототипи в рамките на училишни и университетски проекти); а също така и в модерното изкуство.

Обектите, произведени по процеса FDM са със значително по-висока механична устойчивост от тези, които са произведени чрез стереолитография. Разбира се, крайният резултат (здравина, твърдост, гъвкавост) зависи от конкретно използваните в случая мастила за принтиране. FDM също така предлага добра разделителна способност и поради това много добре възпроизвежда фините детайли на обектите. При някои обекти може да се наложи постпроизводствена обработка.

Недостатъците на FDM принтирането са свързани основно с риска от замърсяване на околната среда  (отпадни води, понякога – разтворители, генериране на прахови частици по време на построизводствената обработка). Бракуваните и изобщо негодните за използване завършени обекти обикновено имат дълъг срок на разграждане и също представляват замърсители на средата.

  • Semi-solid Extrusion (EXT)

Подобно на FDM, EXT също е процес, основан на екструзия на полутечно мастило от главата на принтера. В този случай, обаче, материалът не е термопластичен, а е разтворен или суспендиран в среда от разворител, образувайки мастило с гъста пастообразна консистенция. Това позволява процесът да се извършва при ниска температура, което може да е критично важно при някои изследователски задачи (виж по-долу). Както при FDM, обектът се изгражда върху платформа, която се смъква автоматично надолу паралелно с нарастване на височината на обекта.

EXT често се използва в научно-изследователската дейност (за създаване на среди и подложки за тъканно култивиране; нови лекарствени форми за прицелно или контролирано във времето освобождаване на активната субстанция). Този процес има  голям потенциал за приложение в съвременната фармацевтична индустрия [4-9]. Подходящи материали за биологичните приложения на EXT са поливинилпиролидон, полиетиленгликол, метилцелулоза, хидроксипропилметилцелулоза, поликапролактон и други [7-9]. EXT намира приложение и в кулинарията и хранителната индустрия за получаване на ястия, десерти, украси за торти, шоколадови или захарни фигури и пр.  чрез екструзия на ядивни мастила  (фиг. 6).

Фигура 6. Използване на EXT за целите на кулинарията. Източник: Grup de recerca de la Universitat de Columbia – https://www.creativemachineslab.com/digital-food.html, CC BY-SA 4.0, https://commons.wikimedia.org/w/index.php?curid=84202502

EXT процесът прави потенциално възможно 3D принтирането на жива тъкан чрез използване на мастило, съставено от живи клетки, суспендирани в хидрофилен гел.

Тъй като мастилата, използвани за 3D принтиране с процеса EXT не са нито фоточувствителни (както при стереолитографията), нито термопластични (както е при FDM), нанесените слоеве не застиват бързо и не прилепват незабавно един към друг. Поради това, завършеният обект обикновено има нужда от време, през което да се изпари разтворителят и/или да застине напълно.  Обектите, принтирани чрез EXT могат да загубят формата си по време на окончателното си застиване, да се изкривят или да се свият. Минималната дебелина на слоя при процеса EXT е доста висока  – около 800 μm. Това означава сравнително ниска разделителна способност.

  • PolyJet

PolyJet е технология, основана на използване на течно мастило. Подобно на SLA, при PolyJet се използват фоточувствителни мастила, които се подлагат на селективна полимеризация чрез UV светлина. Мастилата, обаче, не се полагат послойно чрез екструзия, а се изпускат контролирано на капчици от главата на принтера върху движеща се платформа. При PolyJet технологията за изграждането на един и същи обект могат да се смесват различни мастила, което позволява по-голямо разнообразие на качествата на създаваните обекти.

Мастилата за PolyJet могат да бъдат много различни видове. Могат да се използват  повечето от мастилата, които се използват в процеса стереолитография. Най-често използваните са споменатият по-горе ABS (може да има различни модификации), акрилстиренакрилонитрил (ASA, подобен на ABS, но с по-висока устойчивост на топлина и UV-светлина от ABS), метакрилат, поликарбонат и полиетеркетонкетон (PEKK) както и други мастила. За PolyJet има и специално създадени и патентовани серии мастила  – Vero PolyjetTM (на американско – израелската компания Stratasys). Сред тях има и такива, специално разработени за целите на медицината и стоматологията  (напр. MED610 и MED620, които се използват основно за бързо прототипиране).

Предимствата на PolyJet процеса са:

– Относително висока разделителна способност (минималната дебелина на слоя е 160 μm), което дава възможност за създаване на обекти с много сложна вътрешна структура и фини детайли;

– Богат избор на материали, което дава възможност за създаване на обекти с най-разнообразни качества (здравина, гъвкавост, цветоотделка);

На процеса са присъщи освен всички общи недостатъци на 3D принтирането (изредени по-горе) и изпарението на субстанции с неприятна миризма и/или опасни субстанции при полимеризацията (особено ако се използва като материал ABS и ASA). Обектите, принтирани чрез PolyJet процеса обикновено имат нужда от постпроизводствена обработка и, в зависимост от използвания материал, могат да бъдат чувствителни към светлина.

  • Прахово 3D принтиране

При праховото 3D принтиране материалът (в този случай пак наричан „мастило“) е разпрашен. Както при течно-базираните процеси, прахообразното мастило се нанася послойно под контрола на софтуер. Обектът се изгражда върху движеща се платформа.  Отделните слоеве прилепват един към друг чрез селективна полимеризация чрез облъчване със светлина, инфрачервена енергия или, в немалка част от случаите, с помощта на течно лепило. Лепилото може също да се нанася послойно или да се подава струйно или на капки, в зависимост от мастилото и от конкретния обект. Ако мастилото съдържа активен мономер, се инициира полимеризация чрез изпарение на разтворителя, облъчване или загряване.

Минималната дебелина на слоя може да бъде много различна при различните процеси на прахово 3D принтиране, в зависимост от конкретния процес и от използвания материал. Средната дебелина на слоя при праховите процеси е около 200 µm, но може да достигне до 20-30 µm.  Тази много висока разделителна способност дава възможност да се използва за създаване на сложни обекти, съдържащи множество вътрешни кухини и с фини детайли.

Прахообразните мастила за целите на праховото 3D принтиране се получават обикновено чрез смилане на материала на много ниска температура в топкови мелници. В зависимост от материала, температурата на смилане може да бъде различна, но обикновено се провежда на температура, малко под точката на встъкляване на материала. В процеса на смилане могат да се използват различни криогенни газове – втечнен азот, втечнен въглероден двуокис (т. нар. сухо смилане) или смес от криогенни газове и органични разтворители (влажно смилане).

В най-простия си и популярен вид праховото 3D принтиране се използва за създаване на плътни обекти от гипс или смляно на фин прах нишесте, които се напръскват или обливат с лепило и се оставят да засъхнат. Към прахообразния материал могат да се добавят различни оцветители, пластификатори и други компоненти за постигане на желаните качества на обектите (фиг. 7).

Фигура 7. Гипсови прототипи, създадени чрез прахово 3D принтиране. Източник: S Zillayali, CC BY-SA 3.0 <https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0>, via Wikimedia Commons.

Праховото 3D принтиране си има някои специфични недостатъци. Обектите, създадени с помощта на тази технология могат да имат ограничения по отношение на механичните си качества – те имат висока порьозност и, съответно, ниска механична здравина и устойчивост и могат да бъдат лесно чупливи. Почти без изключение, принтираните по прахов процес обекти трябва да преседят известно време след завършването си, за да се изпарят разтворителите и да се завърши окончателно полимеризацията и за да се постигне окончателната здравина на обекта. Също така, почти във всички случаи се налага постпроизводствена обработка – за отстраняване на излишъка от прахообразно мастило, за подобрение на механичните характеристики на произведения обект  и за подобрение на външния вид на обекта, тъй като повърхностите на обектите също са порьозни (шлифоване, полиране и пр.). Праховите процеси произвеждат голямо количество малки частици, които замърсяват околната среда и представляват сериозен здравен риск за операторите на такива производства и за всички, които могат случайно да погълнат или вдишат такива частици.

Праховите процеси за 3D принтиране успешно се използват към момента в научно-изследователската дейност, медицината, стоматологията и фармацията за производство на имплантируеми медицински изделия,  лекарствени форми с ускорено  или удължено освобождаване на активната субстанция; както и на такива, при които е необходимо пулсово освобождаване на лекарството с определена честота, имитираща естествената секреция на субстанцията в организма [10-12]. За да се гарантира безопасността за потребителя, като мастилени вехикулуми в тези производства се използват метакрилат или етилцелулоза.

  • ColorJet

ColorJet не е специфичен процес. Това е регистрирана търговска марка за производство на 3D принтери, използващи прахов процес, както и консумативи за тях. Седалището на компанията се намира в Индия и предлага най-простия и евтин начин за прахово 3D принтиране. Като материал в повечето случаи се използва бял гипс на прах, макар че компанията е разработила и патентовани собствени материали  (напр. серията Visijet C4 Spectrum). Мастилото се наслоява върху движеща се платформа и слоевете се прилепват един към друг с помощта на лепило. Към лепилото могат да се добавят различни бои, така че да се получат обекти с различни цветове.

Минималната дебелина на слоя е около 100 μm, но може да е различна при използване на различни материали. Цената на произведения обект е сравнително ниска. Изобщо, Colorjet е приемливо нискобюджетно решение, ако не е от голямо значение,че произведеният обект има е крехък, чуплив и с висока порьозност. Затова, ColorJet се използва за бързо прототипиране в научно-изследователската дейност; изготвяне на модели за образователни цели; модели за търговски цели, които няма да се съхраняват дълго и/или няма да се подлагат на значителни механични напрежения, и в съвременното изкуство. Някои модели ColorJet принтери използват като мастило хранителен материал, годен за консумация от хора, и с тях се произвеждат по поръчка различни ястия, сладкиши и украси за тях по индивидуална поръчка.

Обектите, създадени чрез ColorJet в повечето случаи имат нужда от постпроизводствена обработка. Излишният гипсов прах трябва да се отстрани (най-често чрез обдухване със струя въздух). Гипсовите обекти задължително трябва да преседят след завършването си, за да се изпари разтворителят в лепилото, иначе ще бъдат меки и ще се деформират лесно. След това обикновено се налага повърхността на обектите да бъде импрегнирана с някакъв друг разтвор (обикновено полимер на база акрил), за да се увеличи механичната здравина и да се запушат повърхностните пори (в противен случай обектът ще адсорбира влага и мазнина от околната среда), като след това отново се налага изчакване за изпарение на разтворителя. Както се вижда, ColorJet използва голямо количество разтворители. Заедно с факта, че праховите процеси изобщо генерират голямо количество малки частици, ColorJet e технология с висок риск за замърсяване на околната среда, носе използва масово поради ниските производствени разходи.

  • Selective Laser Sintering (SLS)

При SLS прахообразният материал се нанася послойно и слоевете се прилепват един към друг чрез облъчване с кохерентен сноп светлина, генериран от главата на принтера. Облъчването със светлина частично активира молекулите на повърхността на взаимодействащите слоеве и улеснява прилепването на праха, нанесен във следващия слой. Геометрията на частиците от съседни слоеве се променя при прилепването, така че между две частици се образува мостче (т. нар. necking – Фиг. 8).

Фигура 8. Образуване на ‘мостче’ между частици от два съседни слоя (стрелките). Източник:  Mendoza.755 – Own work, CC BY-SA 4.0, https://commons.wikimedia.org/w/index.php?curid=76830144

Минималната дебелина на слоя при процеса  SLS е около100 μm.

SLS е приложим основно при 3D принтиране с материали с висока точка на топене и затова най-използвани са металическите мастила. Могат да се използват също някои пластмаси (полиамид, поликарбонат, полистирен и др.), както и термопластични  гуми, стъкла и керамика. SLS се използва често за бързо прототипиране и изпитване на прототипи в научно-изследователската дейност (напр. създаване на субстрати и подложки за тъканно култивиране) и в зъботехниката [11-13]. Към момента, SLS  има ограничено приложение във фармацията, тъй като материалът се подлага на интензивно облъчване и в хода на процеса се генерира допълнително топлина, което може да промени качествата или да инактивира активната субстанция. Ядивни материали, които могат да издържат на висока температура (какао, захар и пр.) също могат да се използват за мастила при SLS за създаване на различни сладкиши и украси за тях.

  • Selective laser melting (SLM)

SLM често се разглежда като разновидност на SLS, тъй като мастилата и при двата процеса са най-често на база метални прахове. Има обаче една съществена разлика: докато лазерната глава на принтера при SLS подава само толкова лъчиста енергия, колкото е необходима да разтопи повърхността на съседни слоеве и да създаде мостчета между тях, при  SLM се използва лазер с висока мощност, чиято енергия е достатъчно висока, за да може да разтопи цял метален блок, така че той да застине в желаната форма (подобно на рутинното металолеене).  Обектите, създадени чрез SLM имат доста по-ниска порьозност от SLS, по-хомогенна вътрешна структура и, съответно, по-добра механична издържливост. Недостатък на SLM е, че задължително се налага шлифоване и полиране на обектите по време на постпроизводствената обработка, тъй като външната им  повърхност непосредствено след създаването им е със сравнително едрозърнеста структура.

Electron beam melting (EBM) е разновидност на SLM, която използва поток от електрони вместо лазер. Използват се изключително металически мастила.

  • Selective heat sintering (SHS)

SHS работи на същия принцип като SLS, но „мастилото“ е термопластично и, съответно,  прилепването на слоевете един към друг се извършва чрез частично разтапяне и последващо сливане на частици от съседни слоеве.  Главата на принтера генерира голямо количество топлина. Най-често използваният материал при SHS е пластмасата (по-точно – полиамид, но могат да се използват и други полимери).

За всички обекти, произведени чрез SLS или  SHS е възможно изкривяване или свиване на обекта по време на принтирането или след това. Възпроизводимостта е сравнително ниска, т.е. не винаги произведените по един дизайн обекти имат напълно еднакви механични качества, дори да са от един и същи материал и дори от една и съща партида. Постпроизводствената обработка (отстраняване на подпорни структури, шлифоване и полиране, импрегниране и боядисване) е задължителна и при SLS, и при SHS.

  • Multi jet fusion (MJF)

MJF представлява съчетание на основния подход на ColorJet (използване на лепила) и на SHS (използване на енергия под формата на топлина за разтапяне на мастилата). Като материал се използва основно полиамид (найлон). Най-общо казано, фино смлян полиамиден прах се полага послойно, облива се или се напръсква с лепило и след това се нагрява селективно под компютърен контрол.  Минималната дебелина на слоя е 80 µm, поради което разделителната способност е много висока. Когато обектът е завършен, обикновено се налага постпроизводствена обработка (отстраняване на излишния прахообразен материал, шлифоване и полиране, и пр.). Порьозността на обектите, произведени чрез MJF е значително по-ниска от тази на обектите, произведени чрез SLS и SHS и поради това външният вид на обектите е по-добър и възпроизводимостта между отделните обекти и отделните партиди е по-висока. Както при всички прахови процеси, образуването и изхвърлянето на малки частици в атмосферата може да е сериозен проблем. Използването на разтворители е допълнителен здравен и екологичен риск

Необходимост от постпроизводствена обработка при различните процеси за 3D принтиране

Не всички обекти, създадени чрез 3D принтиране се подлагат на  постпроизводствена обработка. Понякога от такава просто няма нужда, в други случаи тя би засегнала само външния вид на обекта, а той в конкретния случай може да не е от решаващо значение. Доколко е необходим постпроцесинг зависи от използвания материал; използвания процес; желаните естетически и механични характеристики на обекта; бюджета, с който разполага конкретният потребител, и други фактори, които са строго индивидуални във всеки отделен случай.

Най-общо казано, постпроизводствената обработка може да бъде няколко основни типа:

  • Застиване (втвърдяване)

Почти всички 3D принтирани обекти се нуждаят след завършването си от преседяване, за да „узреят“, т.е. да постигнат желаните от потребителя качества (механични характеристики и пр.)  Обектите, създадени чрез екструзионни технологии (особено тези, които са от материал, който се подава на принтера като полутечна суспензия в среда от разтворител), както и тези, получени чрез използване на прахови процеси и импрегнация с разтворител, са особено чувствителни към механични сътресения веднага след като са били завършени. Постпроцесингът в този случай включва времето за изпарение на разтворителя и постигане на окончателната твърдост на обекта. В някои случаи периодът на изпарение може да се ускори чрез усилване на вентилацията на помещенията за съхранение на прясно създадените обекти. Това, обаче, не винаги е успешна стратегия, тъй като при усилена вентилация се повишава риска от изкривяване и напукване на обектите, неравномерно изсъхване и втвърдяване, повишаване на порьозността и т.н.

  • Отстраняване на подпорни структури

Обектите със сложна вътрешна структура, съдържащи множество кухини, често не са напълно стабилни по време на процеса на 3D принтиране, докато материалът е още мек и гъвкав. Поради това, по време на самото принтиране може да се наложи да се поставят подпори, които да поддържат временно структурата, докато се постигне  устойчивост. Тези подпори трябва да се отстранят след завършването на обекта и неговото „узряване“.  Това е допълнителен етап на обработка, който увеличава времето за изпълнение на поръчката и нейната цена (особено ако това включва ръчен труд).

При стереолитографията подпорните структури се изготвят обикновено от поливинилов алкохол. Тъй като той е водоразтворим, след като обектът е напълно готов, тези подпори могат да се разтворят във вода и да се отстранят автоматизирано и без следа чрез накисване във вода  или чрез отмиване с водна струя. Този начин за отстраняване на подпори, обаче, изисква значително количество  вода, канализация за отвеждане и деконтаминационна система за отработената вода, което може значително да увеличи производствените разходи.

При праховите процеси като SLS и SHS честа практика е подпорните структури да се правят от същия или някакъв друг прахообразени материал, който обаче не се подлага на облъчване или нагряване и остава под формата на прахови частици. След завършване на обекта, този прах може да бъде изсмукан с помощта на вакуумна система или издухан със струя вода или сгъстен въздух. Това отново е свързано с повишаване на производствените разходи заради инсталиране на такава система за отстраняване на подпори, за деконтаминация на отпадните води и/или за вземане на мерки за намаляване на емисиите на прахови частици.

  • Отстраняване на излишен материал

Това е критично важна постпроизводствена стъпка при повечето прахови процеси. Излишният прахообразен материал се отстранява, както беше споменато по-горе, с помощта на водна или въздушна струя или вакуум.

И в двата случая – и при премахване на подпори при прахови процеси, и при отстраняване на „излишен“ материал,  отстраненият материал се губи, т.е. има известен процент „фира“ на материала.

  • Шлайфане и полиране

Обработката на повърхността е незадължителен етап от постпроцесинга при обекти, които са с чисто битово значение, но може да е задължително при тези обекти, при които естетичният външен вид е важен. Шлайфането и полирането често е абсолютно задължително при  производството на машинни части, особено тези, за които се очаква да бъдат подложени на механичен стрес (движение, натоварване, триене). При процесите, които произвеждат обекти с висока повърхностна порьозност или с гранулирана повърхност (особено SLM), също почти неизменно се налага обработка на повърхностите

  • Запечатване на повърхностни пори

Това се налага при процеси, при които е неизбежно образуването на пори  (SLS и SHS). Обикновено се полагат покрития, които осигуряват хидрофобна запечатка (цианоакрилатни полимери), но могат да се използват и други методи, напр. горещо изостатично пресоване.

  • Боядисване

Рядко се налага, тъй като повечето процеси на 3D принтиране използват различно оцветени материали или лепила, къв които се добавят различни оцветители.

Кой процес за кои приложения е подходящ? Основни съображения при избора на технология за 3D печат, подходяща за конкретно приложение

Различните процеси в 3D печатането могат имат припокриващи се приложения. Например, на практика всички могат да се използват за бързо прототипиране. Тъй като, обаче, нуждите на крайните потребители могат да бъдат много различни,  понякога за конкретен проект или конкретно индустриално решение се избира точно определен процес въз основа на приоритетите на потребителя.

Сред съображенията при индивидуалнатта могат да бъдат:

  • Видът на материала, който може да се използва за отпечатване на конкретния обект.
  • По-голямата част от 3D принтерите в момента могат да използват повече от един вид материал. Архитектурни и изложбени модели, както и модели, направени за образователни цели, могат евтино и бързо да бъдат създадени чрез ColorJet, SLA и FDM, които използват гипс или пластмаси. Малките настолни принтери, които работят на ниска скала и произвеждат любителски модели, обикновено се базират на FDM технология. SLS, SHS и SLM се използват, когато обектите задължително трябва да бъдат направени от метал, метални сплави или специални полимери.
  • Достъп до 3D принтер. Обикновено поръчките за 3D принтиране се приоритизират по реда на постъпването и се формира опашка от поръчки. Времето за чакане за изпълняване на поръчката зависи от това налични и достъпни ли са в конкретния регион машини за 3D принтиране и колко са натоварени те. В този случай видът на материала има по-малко значение от достъпността на принтера.
  • Съотношение качество/цена на материала. Пластмасата е здрава, лека, гъвкава, лесно достъпна и, с изключение на някои специални пластмаси, е относително евтина, докато металът обикновено е доста по-скъп.
  • Производствени разходи. Те се образуват, като се отчете конкретният процес, използвания материал и нуждата от постпроизводствена обработка. Както по-горе беше споменато, за разлика от рутинните производствени технологии, каквито са например щамповането и отливането, увеличаването на скалата на производство при 3D принтирането не винаги намалява разходите да производство и, съответно, единичната цена на обекта. Единичната цена включва не само разходите за производство, но и разходите за постпроцесинг (ако такъв е  необходим), както и разходите, свързани с необходимостта за вземане на  мерки за намаляване на замърсяването на околната среда.
  • Вид на процеса. При праховите процеси SHS обикновено предлага по-нискобюджетно решение, отколкото SLS, тъй като закупуването и поддръжката на термична глава на принтера обикновено е по-евтино от това на лазерна глава. Затова обектите, произведени чрез SHS обикновено са по-евтини от тези, които са създадени чрез  SLS.
  • Времето за изпълнение на поръчката, включително времето, което се чака на опашка за използване на принтера и постпроизводствената обработка. Малки по размери обекти с неособено сложен дизайн (напр. пластмасови фигурки, малки модели) могат да бъдат отпечатани за минути до часове. Времето за печат се удължава с нарастване на размера на предметите и може да отнеме цял работен ден, а при много големи по размери обекти – до няколко дни, въпреки че последното се случва рядко. Времето за постпроцесинг има значение, независимо дали постпроизводствената обработка включва етапи като запечатване на пори, шлайфане и полиране или просто се налага да се изчака изпаряване на разтворител. Обикновено, при екструзионните процеси и ColorJet накрая има нужда само от преседяване за достигане на оптимални механични характеристики.
  • Характеристики на крайния продукт (механични, естетични и пр.)

Пластмасите за 3D принтиране са най-различни видове и обектите, създадени с различни видове пластмаси, могат да се различават много по качествата си. В зависимост от приложението на крайния продукт, може да се подбере различно мастило за принтиране. Пластмасата е мастило на първи избор, ако се цели създаване на множтво бързооборотни модели и прототипи (по-евтините пластмаси). Тъй като много пластмаси са термо- и фоточувствителни, ако това би било проблем при завършените обекти, тогава изборът пада на метално мастило. Металът е материал на избор и при  обекти, които  трябва да имат висока топло- и електропроводимост. Пластмасата се обработва и боядисва лесно, но боядисването, шлайфането  и полирането на металните обекти, обаче,  често изисква специални  бои и апаратура.

Механичната устойчивост на различните пластмаси може да бъде много различна.  Обектите, създадени чрез процеса SLA могат да имат много сложна структура и почти не се нуждаят от постпроцесинг, но почти без изключение са крехки и чупливи и могат да се деформират или разпаднат, ако се съхраняват на светло. Така че SLA е неподходяща, ако се цели създаване на обекти с висока механична устойчивост. Обектите, създадени чрез FDM  са механично значително по-здрави, но в зависимост от използвания материал процесът може да има ограничения. PVA, ABS и PLA са най-евтините и, съответно, най-често използвани мастила за FDM. Обектите, произведени от тези материали, са склонни към деформация. Обектите, създадени от PLA са освен това и чупливи. ABS като материал предлага добри механични характеристики, но то е фоточувствителен и съответно излагането на светлина води до нарушение в характеристиките на обектите. Полиуретан може да се използва при създаване на обекти, при които е важно да имат известна гъвкавост, но този материал старее бързо и след известно време започва да се начупва. По-скъпи, но и по-качествени мастила за FDM са PC, PETG и PPE. Те се използват главно в производството на машинни части и различни инструменти за целите на инженерството и строителството. PETG  може да се използва и за производство на прибори и съдове за хранене. В горния край на скалата на качеството на материалите за FDM са някои специални пластмаси, каквито са, например,  PEI и  PEEK. Те се използват за направа на части и инструменти, които са подложени на сериозен механичен стрес (носещи части, движещи се части) и в случаите, когато устойчивостта на топлина е критично важна.  Както вече беше споменато, при всички 3D принтирани обекти е възможно при голямо напрежение да настъпи разслояване, но при обектите, направени от PEEK, прилепването на слоевете един към друг е много добро и рискът от разслояване е нисък. PEEK обаче е сравнително скъп материал. Друг негов недостатък е високата температура на топене  (343°С), поради което при работа с PEEK   трябва да се използва принтерна глава, която може да се нагрява до много висока температура.

Фармацевтичните приложения на 3D принтирането поставят специфични изисквания, които обикновено могат да бъдат изпълнени от екструзионните процеси, които работят на ниска температура (основно EXT) и някои от праховите процеси (без тези при които се използва голямо количество лъчиста енергия и/или се генерира голямо количество топлина). Ограничение на EXT е ниската разделителна способност. Тъй като минималната дебелина на слоя е почти 1 mm, трудно може да се постигне възпроизвеждане на фини детайл.

Праховите процеси имат много висока разделителна способност. Това важи особено за SLS (но там има ограничения по отношение на материала – работи главно с метални прахове), но MJF (който може да използва и разпрашена пластмаса) също има висока разделителна способност.

Обектите, произведени от повечето прахови процеси обикновено са механично здрави (с изключение на гипсовите обекти, отпечатани с ColorJet). Вътрешно присъщата им порьозност, обаче, може да наруши иначе добрите им механични свойства. Когато последното е от критична важност, SLM е процесът на избор, при условие че се извърши съответната постпроизводствена обработка.

Риск от замърсяване на околната среда (свързана с производството, постпроцесинга или с биоразградимостта на бракуваните или изхвърлени ненужни обекти). Екструзионните и някои от праховите процеси са свързани с отделяне на голямо количество изпарения от разтворители. Праховите технологии, в допълнение, генерират и големи количества малки частици. Всичко това имат значително вредно влияние върху околната среда и трябва да бъдет взети специални мерки за намаляването емисията на замърсители (филтриранe, обеззаразяване и пр.).

Софтуер, който се използва за целите на 3D принтирането

3D принтерът се управлява от информацията, която му е подадена като дизайн файл, записан на цифров електронен носител. Файлът съдържа информация за серия от напречни прерези на обекта, който се принтира, всеки на различно ниво по оста z. В хода на същинското принтиране всеки следващ слой, който се нанася, може да бъде еднакъв или различен от предходно нанесените слоеве. Това се определя от информацията, която се съдържа в съответстващия на този слой напречен пререз във файла. Ако обектът, който се изгражда, е със сравнително проста структура и не съдържа фини детайли, тя може да бъде зададена във файла с по-малък брой напречни прерези, докато един обект със сложен външен и вътрешен строеж ще е представен от по-голям брой прерези.

Всеки пререз представлява затворен многоъгълник, който отразява структурата на обекта на това конкретно ниво. Напречните прерези трябва да могат да се наслагват последователно по оста z и не може да се припокриват или пресичат един друг. Желателно е дизайнът на файла да е направен така, че между отделните прерези да няма (много рядко) или да има минимален брой празнини, на които не съответства никакъв пререз. Тъй като не винаги изпълнението на тези изисквания е възможно на 100 %, софтуерите за обработка на дизайн файлове обикновено могат автоматично да коригират малки грешки и несъответствия, без това да се отрази съществено на формата и структурата на обекта.

Изображения, получени с помощта на софтуер за computer-assisted design (CAD) са най-често използваните информационни източници за 3D принтиране. Конвенционалните двуизмерни DWG изображения, които се генерират от често използваните CAD софтуери (какъвто е например AutoCAD) също могат да се използват, макар че се налага те да бъдат предварително конвертирани  в триизмерни изображения от специален, предназначен за това софтуер, какъвто е например Sketchup Pro.

Файловият формат STL (Standard Tessellation Language, стереолитографски файл) е първият, който е бил специално създаден за целите на 3D принтирането. STL форматът е бил разработен през 80-те години на ХХ век от компанията 3D Systems, основана от изобретателят на стереолитографията Чарлз Хъл. Освен AutoCAD, други често използвани  CAD софтуери, които могат да експортират в или да конвертират други файлове до STL формат са  Alibre, Mechanical Desktop, I-DEAS, SolidDesigner, ProE and и много други. Могат да се използват и онлайн ресурси за конвертиране на други файлови формати до STL. Такъв онлайн конвертор, например, е AnyConv (https://anyconv.com/stl-converter/).

Като информационен източник за 3D принтиране могат да се използват и изображения, получени от 3D сканиране на различни обекти или чрез фотограметрия на обикновени двуизмерни изображения, получени чрез заснемане с цифрова камера. Разработени са множество различни софтуери  за фотограметрия, които дават добри резултати. Повечето работятв информационна среда Microsoft Windows (такива са, например, Zephyr3D, PhotoModeler, PhotoSynth и др.), но има и такива, които са базирани на други операционни системи – Linux и MacOS (напр.  Pix4D Mapper, Metashape, OpenDroneMap, и др.). Подробен списък на често използваните софтуери за фотограметрия с базовите им характеристики може да бъде прегледан тук: https://en.wikipedia.org/wiki/Comparison_of_photogrammetry_software

В зависимост от качеството на информацията, записана в дизайн файла, крайният резултат от 3D принтирането може да бъде различен  – от идентичен със замисъла на потребителя или създателя на файла, до нещо доста по-различно от очакваното. Обикновено използването на CAD файлове е свързано с допускане на много по-малко грешки и, съответно, много по-малко различия с първоначалния замисъл, отколкото използването на файлове, получени по някакъв друг начин. Такива грешки във файловете подлежат на корекция на по-късен етап.

Основни насоки за създаване и редактиране на файлове за 3D принтиране

Ако не е наличен или не е достъпен STL файл за конкретен модел,  такъв първо трябва да се създаде с помощта на някой от специализираните софтуери за моделиране, какъвто е например AutoCAD (или някой друг такъв, напр. тези, изредени по-горе). Действително, повечето професионални софтуери за 3D моделиране са платени, но са налични и такива, които могат да се използват безплатно. Последните са предназнчени основно за образователни цели или за използване от любители. Такива софтуери са FreeCAD, 3D Slash, TinkerCAD, Vectary, SketchUp, Leopoly, Sculptris, Rhinoceros и други. Полученият STL файл, представящ модела, се подлага на обработка от друг вид софтуер, който генерира сериите от напречни прерези по оста z, които съответстват на отделните слоеве. Този вид софтуер популярно се нарича „резачка“. Такива са, например, Repetier, OctoPrint, Z-Suite, Tinkerine Suite, Cura, PrusaSlicer, Simplify3D, и други. Полученият от обработката с „резачката“ дизайн файл се подава на принтер хоста, който използва информацията в него, за да управлява принтера така, че да се изгради желаният триизмерен обект. Някои софтуери функционират и като „резачки“, и като принтер хостове – например Cura, 3DPrinterOS, OctoPrint, MatterControl и др.

Професионалните софтуери за  3D моделиране обикновено изискват инсталация на машината на потребителя и най-често имат изискване операционната система да е Microsoft Windows.  Безплатните софтуери по-често се предлагат под формата на плъгини за по-често използваните браузери и могат да се използват и с операционни системи, различни от Windows.

STL файловете представят обекта, който подлежи на моделиране в цифров видпод формата на триангулачна мрежа. Тя описва повърхността на модел на обекта, създаден с помощта на CAD софтуер. Всяка повърхност на обекта се описва в STL файловете под формата на мрежа от съседно разположени триъгълници. Илюстрация на този подход е представен на фиг. 9.

Фигура 9. Полигонална мрежа, представяща 3D изображение на делфин. Източник: Chrschn, Public domain, via Wikimedia Commons.

Разположението на тези триъгълници в мрежата се подчинява на набор от предварително дефинирани правила. Основните правила са четири на брой:

  • Правило „връх към връх“: всеки триъгълник трябва да има два общи ъгъла със съседните триъгълници;
  • Правило на дясната ръка: ъглите трябва да са листвани във файла по ред, обратен на движението на часовниковата стрелка;
  • Правило „нормалата навън“: посоката на нормалния вектор трябва да сочи навън;
  • Правило на плюса: всички координати на ъглите на триъгълниците трябва да бъдат положителни числа.

STL файловете могат да съдържат информация, записана в двоичен код или чрез ASCII код. Файловете с двоичен код обикновено са по-малки като размер и могат лесно да се споделят по електронен път. ASCII-кодираните файлове обикновено се ползват при редактиране и проверка на STL файла, напр. при изпитване на нови CAD интерфейси.

Ако обектите са с много сложна структура, и, съответно, има твърде много повърхности или вътрешни кухини, които трябва да се опишат, STL файловете може да не са подходящи за това. Често използваният и сега AutoCAD може да експортира до STL формат само данни за обекти с плътна вътрешна структура.  Първите STL файлове, създадени през 80-те години, са имали и допълнителни ограничения, свързани с представянето на различни цветове, текстури, материали и на въгрешната структура на обектите. Както вече беше споменато, понякога във файла между отделните повърхности неизбежно се появяват припокривания или празнини, които на практика не могат да се коригират в STL файла и, съответно, не се подават като слоеве на 3D принтера. Поради това, през 2006 г. се появи подобрена версия на  STL формата, която впоследствие стана нов основен файлов формат за CAD  –  Additive Manufacturing File format (AMF) [14].  Все още, обаче, много използвани и в момента 3D принтери (и особено тези, които работят на ниска производствена скала) използват предимно и изключително STL файлове.  На AMF файловете не е присъщ проблема на STL с представянето на вътрешната структура на обектите, тъй като те не използват мрежа от допиращи се двумерни триъгълници, а триизмерни извити триъгълни сегменти и триъгълници, допиращи се не само със страните си и споделящи ъгли        , а и триъгълници, допиращи се „ъгъл в страна“. В AMF файловете може да се запише също информация за цвета и текстурата на подлежащия на принтене обект или отделни негови части, както и редът, в който те трябва да се изпринтят.

Джонатан Хилър, един от разработчиците на файловия формат AMF, поддържа един от най-богатите на информация и удобен за използване сайт, където може да се преглеждат указания и ръководства по CAD дизайн и 3D принтиране, да се използват онлайн CAD ресурси и да се изтеглят безплатно готови дизайни и CAD модели: https://sites.google.com/site/jonhiller/software.

Други безплатни сайтове, предлагащи CAD изображения за AutoCAD и софтуер за 3D моделиране са, например, https://www.arcat.com/, https://www.tinkercad.com/, https://www.sketchup.com/, и други. Един такъв безплатен и предоставен за ползване  3D CAD модел е представен на фиг. 10.

Фигура 10. 3D CAD модел за 3D принтиране. Източник: OKFoundryCompany from Richmond, USA, CC BY 2.0 <https://creativecommons.org/licenses/by/2.0>, via Wikimedia Commons.

Достъпни за общо ползване и безплатни STL и други формати дизайн файлове, могат да се изтеглят оттук: www.thingiverse.com, www.youmagine.com, www.myminifactory.com, https://library.zortrax.com/, https://www.cgtrader.com/, https://cults3d.com/en, https://www.youmagine.com/ https://www.turbosquid.com/Search/3D-Models/free/stl,  както и много други сайтове.

Софтуер за редактиране на STL файлове може да се използва онлайн или да се изтегли от много сайтове, между които са: https://www.meshlab.net/, https://www.blender.org/, https://www.freecadweb.org/, https://www.3dslash.net/index.php, https://www.sketchup.com/.

Test: РО2 Основно ниво

Библиография

  • Kodama H. 1981. Automatic method for fabricating a three-dimensional plastic model with photo-hardening polymer. Rev Sci Instrum, 52(11): 1770–73.
  • Melchels FP, Feijen J, Grijpma DW. 2009. A poly(D,L-lactide) resin for the preparation of tissue engineering scaffolds by stereolithography. Biomaterials, 30(23-24):3801-9.
  • Shelby A. Skoog, Peter L. Goering, Roger J. Narayan. 2014. Stereolithography in tissue engineering. J Mater Sci Mater Med, 25: 845–56.
  • Alhnan A, Okwuosa M, Chijioke T, et al. 2016. Emergence of 3D Printed Dosage Forms: Opportunities and Challenges. Pharm Res, 33 (8): 1817­-32.
  • Goyanes A, Buanz AB, Basit AW, et al. 2014. Fused-filament 3D printing (3DP) for fabrication of tablets. Int J Pharm. 2014;476(1–2):88–92.
  • Wang J, Shaw LL, Cameron TB. 2006. Solid Freeform Fabrication of Permanent Dental Restorations via Slurry Micro-Extrusion. J Am Ceram Soc, 89 (1): 346–9.
  • Khaled SA, Burley JC, Alexander MR, et al. 2014. Desktop 3D printing of controlled release pharmaceutical bilayer tablets. Int J Pharm, 461(1–2):105–11.
  • Azad MA, Olawuni D, Kimbell G, et al. 2020. Polymers for Extrusion-Based 3D Printing of Pharmaceuticals: A Holistic Materials-Process Perspective. Pharmaceutics, 12(2):124.
  • Chua CK, Leong KF, An J. 2014. 1 – Introduction to rapid prototyping of biomaterials. Woodhead Publishing.
  • Sun Y, Soh S. 2015. Printing Tablets with Fully Customizable Release Profiles for Personalized Medicine. Adv Mater, 27(47):7847-53.
  • Edelmann A, Dubis M, Hellmann R. 2020. Selective Laser Melting of Patient Individualized Osteosynthesis Plates-Digital to Physical Process Chain. Materials (Basel), 13(24):5786.
  • Tan W, Gao C, Feng P, et al. 2021. Dual-functional scaffolds of poly(L-lactic acid)/nanohydroxyapatite encapsulated with metformin: Simultaneous enhancement of bone repair and bone tumor inhibition. Mater Sci Eng C Mater Biol Appl, 120:111592.
  • Hiller J, Lipson H. 2009. STL 2.0: A Proposal for a Universal Multi-Material Additive Manufacturing File Format“. Solid Freeform Fabrication Symposium (SFF’09), Aug 3-5 2009, Austin, TX, USA.
  • Kodama H. 1981. Automatic method for fabricating a three-dimensional plastic model with photo-hardening polymer. Rev Sci Instrum, 52(11): 1770–73.
  • Melchels FP, Feijen J, Grijpma DW. 2009. A poly(D,L-lactide) resin for the preparation of tissue engineering scaffolds by stereolithography. Biomaterials, 30(23-24):3801-9.
  • Shelby A. Skoog, Peter L. Goering, Roger J. Narayan. 2014. Stereolithography in tissue engineering. J Mater Sci Mater Med, 25: 845–56.
  • Alhnan A, Okwuosa M, Chijioke T, et al. 2016. Emergence of 3D Printed Dosage Forms: Opportunities and Challenges. Pharm Res, 33 (8): 1817­-32.
  • Goyanes A, Buanz AB, Basit AW, et al. 2014. Fused-filament 3D printing (3DP) for fabrication of tablets. Int J Pharm. 2014;476(1–2):88–92.
  • Wang J, Shaw LL, Cameron TB. 2006. Solid Freeform Fabrication of Permanent Dental Restorations via Slurry Micro-Extrusion. J Am Ceram Soc, 89 (1): 346–9.
  • Khaled SA, Burley JC, Alexander MR, et al. 2014. Desktop 3D printing of controlled release pharmaceutical bilayer tablets. Int J Pharm, 461(1–2):105–11.
  • Azad MA, Olawuni D, Kimbell G, et al. 2020. Polymers for Extrusion-Based 3D Printing of Pharmaceuticals: A Holistic Materials-Process Perspective. Pharmaceutics, 12(2):124.
  • Chua CK, Leong KF, An J. 2014. 1 – Introduction to rapid prototyping of biomaterials. Woodhead Publishing.
  • Sun Y, Soh S. 2015. Printing Tablets with Fully Customizable Release Profiles for Personalized Medicine. Adv Mater, 27(47):7847-53.
  • Edelmann A, Dubis M, Hellmann R. 2020. Selective Laser Melting of Patient Individualized Osteosynthesis Plates-Digital to Physical Process Chain. Materials (Basel), 13(24):5786.
  • Tan W, Gao C, Feng P, et al. 2021. Dual-functional scaffolds of poly(L-lactic acid)/nanohydroxyapatite encapsulated with metformin: Simultaneous enhancement of bone repair and bone tumor inhibition. Mater Sci Eng C Mater Biol Appl, 120:111592.
  • Hiller J, Lipson H. 2009. STL 2.0: A Proposal for a Universal Multi-Material Additive Manufacturing File Format“. Solid Freeform Fabrication Symposium (SFF’09), Aug 3-5 2009, Austin, TX, USA.

„Приложението на 3D биопринтиране и ИКТ за зелени продукти и процеси“

НИВО ЗА НАПРЕДНАЛИ

3D биопринтирането е развиваща се технология с приложения в цялата гама от биомедицински изследвания.

Contents

 

Области на приложение на 3D биопринтирането

3D биопринтирането е развиваща се технология с приложения в цялата гама от биомедицински изследвания. Методът, използващ биологичен субстрат или „биомастило“, направен от структурни компоненти, растежна среда и клетки, може да произведе върху оборудване за 3D печат биологични структури, които имитират отблизо структурата на клетките в живите организми. Използвайки същия производствен модел като традиционния 3D печат, редица 2D пластове се разделят от 3D компютърен модел, за да се отпечата правилния биологичен състав слой по слой с прецизно подреждане на тъкани и клетки. Подходът на 3D биопринтиране дава възможност за решаване на проблеми, свързани с разработването на лекарства, регенеративната медицина, донорството на органи и лечението на рак. Тази нововъзникваща технология предлага голяма точност при пространственото разположение на клетки, протеини, ДНК, лекарствени частици, растежни фактори и биологично активни вещества, за да направляват по-доброто образуване на тъкани. Тази мощна технология е много обещаваща по отношение на подобряване на производството на тъкани към физиологично релевантни тъканни конструкции, тъканни модели, тъкани и органи и модели на органи върху чип за медицината и фармацевтиката.

Технологията за биопринтиране има широко приложение в различни области като тъканно инженерство и регенеративна медицина, трансплантационна медицина, скрининг на лекарства, високопроизводителни анализи и изследване на рака (Фиг. 1). Биопринтирането за тъканно инженерство и регенеративна медицина се изучава повече от десетилетие и са произведени анатомично правилни клетъчни конструкции и скелети за различни видове тъкани: от съединителна и епителна тъкан до мускулна и нервна. Със своето голямо предимство при моделиране и прецизно позициониране на множество типове клетки, биопринтирането е преодоляло един от основните недостатъци на традиционните техники за производство на скеле (имплант) и е улеснило изграждането на нативни тъкани с хетероклетъчна микросреда. Въпреки че по-голямата част от усилията са насочени към използване на фундаменталните подходи за биопринтиране, като биопринтиране на базата на лазер, капчици и екструзия, наскоро беше отделено значително внимание и на биопринтирането за производство на функционална тъкан. По-специално, значителна работа бе посветена на биопринтирането за трансплантация. Тъй като е постигнат допълнителен напредък в биоматериалите, клетъчните и трансплантационните технологии, след като биопринтирането бъде разрешено за употреба от хора то ще може да осъществи всички процеси до крайното получаване на функционални тъкани и органи и ще осигури множество предимства в операционните зали. Преди да навлезе в клиничната практика, биопринтирането вече направи голям скок във фармацевтичната употреба, тъй като не изисква никакви регулаторни одобрения и в момента има нововъзникващ пазар за производство на тъкани за тестване на лекарства и високопроизводителни анализи. Биопринтирани тъканни модели (например черен дроб), произведени от множество типове клетки и осигуряващи сложна хетероклетъчна физиологична среда, са използвани при скрининг на лекарства. Освен това биопринтирането наскоро беше приложено в изследванията на рака за изучаване на патологията, растежа и метастазите на рака във физиологично релевантна микросреда. В този обучителен материал е направен изчерпателен преглед на областите на приложение на технологията и е представена задълбочена дискусия за успешно отпечатани тъкани за тъканно инженерство и регенеративна медицина, трансплантация, скрининг на лекарства, високопроизводителни анализи и изследвания на рак. За всяка област на приложение се обсъждат предимствата и ограниченията на съществуващите технологии.

Фигура 1. Области на приложение на биопринтирането.

Тъканно инженерство и регенеративна медицина

Биопринтирането на функционални органи на клинично ниво остава все още непостижимо, тъй като то е изправено пред редица предизвикателства като интегриране на съдовата мрежа от артерии и вени до капиляри, комбинация от различни типове клетки за постигане на сложната органна биология, ограничена структурна, механична цялост и дългосрочна функционалност. Въпреки тези предизвикателства, успешно са биопринтирани голямо разнообразие от тънки или кухи тъкани, като например кръвоносни съдове, или тъкани, които не се нуждаят от васкуларизация, като хрущяли.

Костна тъкан

Костната тъкан е основна в тялото и е ключов компонент на мускулно-скелетната система. Като цяло, тя преодолява нараняванията и дегенерацията чрез своите силно регенеративни способности. Въпреки това, в някои случаи костта не успява да заздравее правилно и е необходимо лечение. Съществуващите терапии обаче имат значителни недостатъци. Иновациите в биопринтирането и тъканното инженерство са много обещаващи за подобряване както на качеството, така и на ефикасността на костно-реконструктивните терапии. На практика, прилагането на 3D биопринтиране на кости все още не е медицински факт, тъй като използваните понастоящем резорбируеми скелета не са конструирани с помощта на растежни фактори или автоложни клетки. Въпреки това, най-новите изследвания бързо подобряват техниките за 3D биопечат, както и 3D печатащите материали, като се разработват материали, които притежават свойства, фино настроени да реконструират специфични за пациента дефекти. Тези изследвания изглежда водят към бъдеще на резорбируеми скелета, които включват подходящи растежни фактори и остеопрогениторни клетки. Времето ще покаже дали тези терапии ще станат широко достъпни и стандартни в медицинската практика.

В скорошни проучвания някои автори използват термичен мастиленоструен биопринтер за изграждане на поли(етиленгликол) диметакрилатен (PEGDMA) скелет. Наночастици от биоактивно стъкло и хидроксиапатит (HA) са използвани за съвместно отпечатване на човешки мезенхимни стволови клетки, получени от костен мозък (hMSCs) при едновременна полимеризация. Този подход позволи равномерно разпределение на hMSCs в сравнение с ръчно пипетирани hMSCs, които се натрупват в долната част на скелето поради гравитацията. Биоотпечатаните структури, капсулиращи hMSCs и HA, показват висока клетъчна жизнеспособност, производство на колаген и алкална фосфатазна активност след 21-дневно in vitro културане. За целите на in situ биопечат, бе осъществено принтирането на HA частици, където е използвана лазерна система за депозиране на HA наночастици при мишки с черепни дефекти.

В друго проучване с помоята на биопринтиране са отпечатани хетероцелуларни тъканни конструкции, изработени от Matrigel™ и алгинатни хидрогелове. Ендотелните прогениторни и мултипотентни стромални клетки са биопринтирани по пространствено контролиран начин. Получените конструкции са имплантирани подкожно в имунодефицитни мишки. Чрез интегриране на остеоиндуктивни двуфазни калциеви фосфатни микрочастици, мултипотентните стромални клетки са диференцирани в остеогенна линия с ускорено образуване на кост за 6 седмици. В допълнение към остеоиндуктивните материали, добавянето на растежни фактори също е от решаващо значение за диференциацията на стволовите клетки в костната тъкан. Доказано е, че добавянето на костен морфогенетичен протеин (BMP)-2 има важна роля за съдбата на стволовите клетки. С помощта на мастиленоструен биопринт на шаблонен BMP-2 върху покривни стъкла, покрити с фибрин, са отпечатани първични мускулни стволови клетки. Беше показано обаче, че те са диференцират в остеогенна линия, дори когато са поставени при условия на миогенна диференциация.

Хрущялна тъкан

През последните две десетилетия бе постигнат значителен напредък не само в областта на костната тъкан, но и в хрущялната. Следователно, съществува реален потенциал техниките за регенериране, а не за заместване на увредени или болни кости и стави, един ден да достигнат до болницата. Все още обаче трябва да се решат няколко ключови предизвикателства, преди това да стане реалност. Те включват главно васкуларизацията, особено когато се налага възстановяване на голям костен дефект. Други важни въпроси са необходимостта от използване на инженерни сложни градиенти за регенерация на интерфейса кост-мека тъкан и рекапитулиране на стратифицираната зонална архитектура, присъстваща в много възрастни тъкани, като например ставния хрущял. Въпреки това, съществуващите подходи за хрущялно инженерство имат голям потенциал за прецизно изграждане на клетки и биоматериали със сложни модели. Те могат да имитират естествени тъкани с зонално диференцирани клетки и структура на извънклетъчната матрица (ECM).

Правени са опити и с лазерно биопринтиране на хондроцити, диференцирани от стволови клетки. Тази стратегия се основава на компютърно подпомогната техника за биопроизводство с помощта на LIFT. Чрез този подход успешно бяха отпечатани мезенхимни стволови клетки от свински костен мозък (MSCs) с висока жизнеспособност. Те поддържат своята функционалност и способност за диференциация в остеогенни и хондрогенни линии. Мастиленоструйният биопринт също се прилага в инженерството на хрущялната тъкан, както и за регенериране на дефекти на хрущяла. Настолен принтер на HP беше модифициран и използван за отпечатване на човешки хондроцити, заредени в PEGDMA хидрогел. По този начин, изработената хрущялна конструкция има механични свойства и биохимичен състав, близки до естествения хрущял. Съвсем наскоро беше създаден метод за хибриден биопринт за производство на механично подобрени конструкции на хрущялна тъкан чрез комбиниране на техники за 3D биопринтиране и електропредене. В това проучване е осъществено електропредене на поликапролактонови (PCL) влакна заедно с мастиленоструен биопринт на заешки еластични хондроцити във фибрин-колагенов хидрогел.

Въпреки големия успех в биопринтирането на хрущялна тъкан, производството на зонално стратифицирани ставни хрущялни тъкани с различни структурни, биомеханични и биологични свойства все още е предизвикателство и са необходими още изследвания в областта за да се постигне производството на конструкции на ставна хрущялна тъкан със зонална диференциация, включващи повече хоризонтални и по-тънки колагенови влакна с висока клетъчна плътност в повърхностната зона и относително вертикални и по-дебели колагенови влакна с по-малка клетъчна плътност в по-дълбоките зони.

Сърдечна тъкан

Сърдечно-съдовите заболявания са основна смъртна причина в света. В това отношение инженерството на сърдечна тъкан и сърдечни клапи е от изключително значение. През последното десетилетие беше постигнат значителен напредък в изучаването на естествените свойства на сърцето за регенерация и възстановяване с помощта на различни стратегии, включително използване на различни биоматериали, микро- и нанотехнологии и децелуларизация. Въпреки това, основната трудност в инженерството на сърдечната тъкан е включването на сложни, хетерогенни микро- и макро-сърдечни тъканни структури от различни типове клетки, за да се прилепят, пролиферират и в крайна сметка да поправят и ремоделират увредените части. 3D биопринтирането се появи като стратегия за справяне с това предизвикателство чрез предоставяне на технология за изграждане на скелета с висока разделителна способност с хетерогенни биохимични и механични характеристики. Въпреки това са направени ограничен брой опити за биопринтиране на модели на сърдечна тъкан. Беше осъществено базирано на екструзия биопринтиране на тъканни сфероиди, включващи човешки съдови ендотелни клетки (HUVECs) и сърдечни клетки, получени от миокардни тръби на пилешки ембриони. Друг подход се основава на биопринтиране на конструкция от сърдечна тъкан във форма на половин сърце със свързани вентрикули с помощта на мастиленоструен биопринт. Лазерно-индуцираният подход (LIFT) също бе използван за моделиране на HUVECs и hMSCs в геометрично дефиниран модел върху полиестерна уретанова урея и получените проби са трансплантирани в зоната на инфаркт на сърца на плъх след LAD лигиране. Осем седмици след трансплантацията се наблюдава повишено образуване на съдове в сравнение със случайно отпечатани клетки като контролни групи и полученият миокарден пластир осигурява значително функционално подобрение.

Друго важно направление е инженерството на сърдечни клапи, тъй като те не притежават регенериращ капацитет и при дисфункция, когато увреждането или заболяването е пагубно, те трябва да бъдат заменени с механични или биологични еквиваленти на протеза. Въпреки това, производството на такива заместващи клапи е ограничено от тромбогенност и калцификация. Независимо обаче от значимостта на това направление, са осъществено ограничени проучвания по отношение биопринтирането на сърдечни клапи. Първото получаване на сърдечна клапа е постигнато чрез използване на биопринтер с две глави, модифициран от принтер Fab@Home. В друго проучване, биопринтирането с двойна дюза на композитен алгинат-желатинов хидрогел беше използвано за изграждане на тънки хидрогелови дискове и пространствено биопринтиране на гладко мускулни клетки на аортния синус (SMCs) и интерстициални клетки на аортната клапа (VICs). В скорошно проучване същите автори осъществиха биопринтиране на композитни хидрогелове, използвайки метакрилирана хиалуронова киселина (Me-HA) и метакрилиран желатин (Me-Gel), натоварени с човешки аортни клапни интерстициални клетки (HAVICs). Получените проби са проектирани с форма на трилистна клапа и клетките, отпечатани с повишена концентрация на Me-Gel, показват по-добро разпространение.

Чернодробна тъкан

Черният дроб е най-голямата жлеза в човешкото тяло. Той играе ключова роля в метаболизма, производството на жлъчни киселини, детоксикацията и регулирането на водния и електролитен баланс. Токсините или лекарствата, които стомашно-чревната система абсорбира, достигат първо до черния дроб, преди да навлязат в кръвния поток. Чернодробните заболявания са друга водеща причина за смъртност в световен мащаб. Следователно, създаването на модел на чернодробна тъкан in vitro, който симулира основните функции на черния дроб, може да бъде важна платформа за изследване на чернодробни заболявания и разработване на нови лекарства. Понастоящем ново развиващите се технологии за 3D биопринтиране са способни да разработят in vitro модели на чернодробна тъкан както в статични скелета, така и в динамични модели от типа черен дроб върху чип.

Първото биопринтиране на индуцирани човешки плурипотентни стволови клетки (hiPSCs) е извършено чрез стимулиране на hiPSC и диференцирането им в хепатоцити с цел разработване на чернодробни микрооргани. Освен това, за биопринтиране на чернодробни тъканни структури в по-големи тъканни модели, са използвани и клетки на чернодробен карцином HepG2.

Всъщност, 3D-биопринтирането на скелета от чернодробна тъкан и конструирането на черен дроб върху чипове могат значително да помогнат за по-ефективното и рентабилно разработването на подходящи in vitro модели на чернодробна тъкан. Така ще бъде осигурена мощна платформа за скрининг на лекарства и определяне на молекулярния механизъм, лежащ в основата на чернодробните заболявания.

Белодробна тъкан

3D биопринтирането увеличава възможността за възпроизводимо създаване на сложни макро- и микромащабни биоструктури, използвайки множество различни типове клетки. Това е обещаваща стратегия за производството на многослойни кухи органи, което е голямо предизвикателство за по-традиционните техники за тъканно инженерство. Понастоящем основният напредък в бипринтирането на органи от респираторната система е ограничен до трахеята. Наличните техники за изграждане на трахеална присадка са ценна основа за биопринтиране на целия бял дроб. Като цяло повечето подходи за 3D биопринтиране на трахея, комбинират биологични хидрогелове, имобилизиране с клетки, заобикалящи здрава полимерна структура.

Като цяло, белият дроб се класифицира хирургично като твърд орган. Въпреки това, за целите на тъканното инженерство е по-полезно да се разглежда като разклонен набор от тръби. По този начин напредъкът и трудностите, открити при биопринтирането на други тубуларни органи, могат да помогнат при биопринтирането на бял дроб. Опитите за белодробен биопринт са нови и има само няколко успешни опита в областта. Наскоро бе постигнато биопринтиране на in vitro модел на въздушно-кръвна бариера чрез разработването на зонално стратифицирана тъканна конструкция в няколко слоя. Първо е отпечатан тънък слой. Той служи като базална мембрана. След това е биоотопечатан един слой от ендотелни клетки, за да се улесни прикрепването на клетките към следващия слой. По-късно е добавен нов слой върху предварително сглобената конструкция, последвано от биопринтиране на един слой епителни клетки.

Стремейки се към по-сложна геометрия, някои автори са разработили дистален модел на бели дробове със съдови и дихателни пространства. Те използват поли(етиленгликол) диакрилат и стереолитографски принтер и успяват да създадат „дишащ модел“ с вентилация на приливния въздух и кръвен поток. Прилагайки този модел, те изследват белодробния транспорт чрез измерване на оксигенацията на кръвта, влизаща и излизаща от конструкцията. Въпреки че печатната васкулатура е ограничена само до 300 µm, това вече е голяма стъпка към създаването на клинично значими белодробни тъкани.

Нервна тъкан

Човешката нервна система е изключително сложна физиологична мрежа, чиито анализ е голямо предизвикателство поради трудното изолиране на първични проби. Една от приложимите алтернативи за изследване развитието на нервната система, заболяванията и регенеративните процеси са животинските модели. Те обаче не са в състояние да се справят с някои видове специфични характеристики на човешката нервна система. Разработват се и все по-сложни in vitro модели на човешка нервна система, но все още са необходими бъдещи задълбочени изследвания по отношение по-доброто симулиране на микросреда и клетъчни характеристики. Прилагането на инженерни подходи при създаване на нервна тъкан успяват да внедрят нови инструменти, които позволяват на изследователите да наблюдават прецизно условията за in vitro клетъчно култивиране и по-добре да моделират формирането, функционирането и възстановяването на нервната система.

Въпреки това, проучванията, извършена в областта на биопринтирането на нервна тъкан, са доста оскъдни. Някои от тях се основават на биопринтиране на C17.2 клетки върху колагенов слой до фибринов диск, съдържащ съдов ендотелен растежен фактор (VEGF). Използвайки този модел, е анализиран ефектът на VEGF върху пролиферацията и миграцията на миши невронни стволови клетки (C17.2). Проучването показва, че невронните клетки мигрират към VEGF-освобождаващ фибринов гел и се размножават успешно. Наскоро други изследвания представиха биопринтиране на термочувствителен полиуретанов хидрогел с регулируема твърдост и способност за желиране при 37°C без изискване за омрежващ агент. Ефективността на биомастилото се постига чрез зареждането му с невронни стволови клетки и инжектирането му в модел на невронно увреждане на ембрион на зебра. Получените резултати показват, че инжектираният гел възстановява функцията на увредената нервна система за 6 дни.

Използван е и подход без скеле, при който утайка от Шванови клетки (SCs) и стволови клетки от костен мозък (BMSCs) се екструдират в 3D отпечатана агароза. След агрегация на клетките в агарозата се образува присадка на нервна тъкан с три лумена във всяка. Конструираните присадки са имплантирани в мишки и е оценена тяхната хистология и функционалност. Броят на пробите е ограничен, за да се направи окончателно заключение за ефективността на 3D биопринтираните присадки спрямо наличните колагенови в търговската мрежа. Представеният случай демонстрира доказателство, че концепцията за биопринтиране на нервни присадки може да бъде успешна.

Панкреатична тъкан

Изучаването и лечението на заболявания на панкреаса, като диабет и рак, е възпрепятствано от ограничения in vivo достъп до панкреатичната тъкан. Въпреки това, триизмерните (3D) тъканни модели, които точно имитират естествения орган, имат голям потенциал в биомедицинските приложения, като осигуряват ефективни платформи за изследване на развитието на тъканите и хомеостазата, както и за симулиране на заболявания при фармацевтични тестове. За съжаление, първичните β-клетки на панкреаса не оцеляват лесно in vitro и са направени много малко опити за диференциране на β-клетки от човешки стволови клетки. В това отношение регенерирането на тъканта на панкреаса е основно илюстрирано до степента, в която β-клетките от миши линии или инсулиномни клетки са били използвани за производство на Лангерхансови острови. По отношение биопринтирането на панкреатична тъкан са осъществени ограничен брой изследвания. Наскоро човешки и миши Лангерхансови острови, както и INS1E β-клетки на инсулином на плъх, бяха капсулирани в алгинатни или алгинат-желатинови хидрогелове и бяха отпечатани в двуслойни скелета. В допълнение, скорошна работа демонстрира микропроизводството на тъканни нишки без скеле (със силна експресия на инсулин) за биопринтиране на базата на екструзия, където тъканните нишки са направени от фибробласти на плъх и TC-3 β-клетки на инсулином на мишка. Предложен е и иновативен подход, включващ използването на тъканни нишки за подобряване на процеса на биопринтиране.

Тези експериментални опити в напредналата технологична област на биопринтирането ще проправят пътя към нови технологични възможности за лабораторно получаване на функционални тъкани и органи. Очаква се, че знанията и моделите, генерирани от изследванията в областта на биопринтирането, не само ще стимулират голямо технологично развитие в тъканното инженерство, но също така ще отворят радикално нови възможности в медицината, като например изследване на панкреатичните заболявания ex vivo в изработена тъкан, разработване на нови лекарства и евентуално улесняване на подмяната на наранена или болна тъкан.

Кожна тъкан

Кожата е най-външното защитно покритие на човешкото тяло и е в пряк контакт с околната среда. Това я прави силно уязвима за нараняване. Раните и дефектите на кожата могат да бъдат резултат от травма, кожни заболявания, изгаряне или отстраняване на кожата по време на операция. Такива състояния изискват спешни терапевтични интервенции за възстановяване на структурата и функцията на кожата и възобновяване на нормалната мобилност на пациента. Освен това наличието на рани, ако не се лекуват незабавно, може да доведе до бактериално замърсяване и свързаните с това усложнения. Нещо повече, дори незначителни деформации могат да създадат психологически стрес на засегнатите лица, особено на децата. Понастоящем най-добрата инженерна алтернатива за кожна тъкан е използването на автоприсадки. Съществуват обаче редица ограничения, включително количеството и размера на наличните присадки, създаване на вторична рана и други рискове. Използването на други видове кожни присадки, като алографти и евентуално ксенотрансплантати, е свързано с рискове от имунни реакции и предаване на заболявания, допълнително към някои етични и културни ограничения. Има и възможност за използване на материали за превързване на рани като тези на основата на полимери или техните комбинации с други вещества. Те обаче не са живи и трудно могат да бъдат заменени от човешка тъкан. В това отношение тъканното инженерство е перспективна област за подобряване на лечението на кожни дефекти, но трябва да се открият решения за предизвикателства като разработване на многопластова естествена кожна архитектура и съдови мрежи. Вече са предложени някои модели, при които освен биоматериал се използват живи клетки, биологични или химични сигнали с цел формиране на функционална кожа. Въпреки това, такива конвенционални подходи за тъканно инженерство се сблъскват с редица проблеми като нехомогенно разпределение на клетките, неспособност да се интегрира и васкуларизира конструкцията при нейното имплантиране, последващо отхвърляне на имплантирания биоматериал заедно с образуваната кожа. Въпреки че на пазара вече се срещат няколко продукти на кожа, получена с тъканно инженерство, имплантирането й се сблъсква с ред ограничаващи фактори, като основен и критичен за клиничния успех е васкуларизацията на кожния заместител.

При изграждането на кожна тъкан са използвани различни подходи за тъканно инженерство и са създадени различни тъканни заместители, включително автоложна кожна присадка (златен стандарт), алографти, ацелуларни дермални заместители и целуларизирани търговски продукти, подобни на присадки. Биопринтирането на кожна тъкан е постигнато чрез използване на биопринтер с осем канала, базиран на клапи, където е отпечатана 13-слойна тъканна конструкция с помощта на колагенов хидрогел. Кератиноцитите са биопринтирани върху редуващи се слоеве от човешки фибробласти на препуциума и слоеве безклетъчен колаген. Получените конструкции показват по-плътно опаковани клетки в слоевете на епидермиса, в сравнение с дермата, която е с ниска клетъчна плътност и по-малко отлагане на ECM. В допълнение към капковото биопринтиране, лазерният биопринт се прилага и за биопроизводство на заместители на кожна тъкан. В скорошно проучване е анализиран ефектът от биопринтирането на ендотелни клетки, включването им в кожни заместители и последващата макроваскуларизацията на ремоделираната тъкан. Подходът включва капсулиране на неонатални човешки дермални фибробласти и епидермални кератиноцити (NHEKs) в колаген. След това слоят на дермата се полага, последвано от моделиране на човешки дермални микроваскуларни ендотелни клетки (HMVECs) върху слоя на дермата на конструкцията. Процесът е завършен чрез обвиване на фибриновия слой с натоварени с колаген NHEKs. След това произведените кожни заместители се имплантират върху гръбнака на мишки и се сравняват с наличните в търговската мрежа кожни заместители като контрола. Получените резултати показват, че биопринтираните HMVEC образуват микросъдове и имплантираните конструкции генерират свиване в сравнение с контролните групи. Освен това, в други проучвания е демонстрирано in situ биопринтиране на стратифицирани кожни заместители чрез редуващи се слоеве фибриноген-колаген и тромбин, натоварени със стволови клетки, получени от амниотична течност (AFS). При този подход заместителите на кожата са 3D биопринтирани директно върху рани на прасета и е наблюдавано по-добро възстановяване на естествената кожа в сравнение с контролните групи. Въпреки усилията за биопринтиране на кожната тъкан, биоконструкцията на заместители на кожа, които на практика симулират формиране на естествена такава, все още е предизвикателство, тъй като интегрирането на потните жлези и космените фоликули остава непостижимо.

Съдова тъкан

Технологията за триизмерен (3D) печат бързо се превърна от футуристична технология в обещаваща наука, за която се смята, че революционизира клиничната практика, като предоставя персонализирано оборудване, модели на органи за хирургични практики, части за подмяна на органи и съвременни лекарства. Въпреки че първоначално тази технология е била предназначена за предоставяне на хирургически модели и прототипи, учените бързо я усъвършенстваха с цел производство на тъканни конструкции за регенеративанта медицина. Въпреки това, мащабното прилагане все още е ограничено поради анатомичната сложност, композиционното (клетъчно и извънклетъчно) разнообразие и васкуларизацията на човешките тъкани.

Понастоящем, синтезът на съдова тъкан се извършван чрез различни подходи за биопринтиране, включително екструзия, капково и лазерно биопринтиране. При биопринтирането, базирано на екструзия, е използван широк спектър от техники за екструдиране. Някои учени използват екструзия с коаксиална дюза, при която хидрогеловете, включително натриев алгинат и хитозан, се биопринтират директно в тръбовидна форма с капсулирани клетки. При прилагане на коаксиален поток (сърцевина – обвивка), отделеният омрежващ агент (протичащ през сърцевината) осъществява контакт с прекурсорния разтвор на хидрогел (протичащ през обвивката) и ускорява желирането и образуването на тръбовидни конструкции. Този подход улеснява директното биопринтиране на съдови структури по практичен начин. Съществуват и други стратегии за директен биопринт на съдова тъкан, като например биопринтиране с помощта на мастиленоструен апарат на слой по слой капчици хидрогел, съдържащи клетки. Използвайки конструкция тип отдолу нагоре, мастиленоструйният биопринт позволява изграждането на разклонени тръби в хоризонтална и вертикална посока. Подобен подход беше приложен и с помощта на лазерен биопринт. Във всички гореспоменати проучвания се използват техники, базирани на скеле. Въпреки това, някои изследвания за биопринтиране на съдови тъкани се основават на подход без скеле, където тъканните сфероиди се произвеждат един по един и самостоятелно се сглобяват в по-големи тъканни единици.

Въпреки че 3D биопринтирането на сфероиди допринесе за огромния напредък в производството на съдови структури със здрава структурна и функционална цялост, конструирането на клинично значими съдови и васкуларизирани тъканни конструкции все още е далеч в бъдещето. Необходими са иновативни изобретения, които подобряват разделителната способност и получаването на анатомично по-точни конструкции, като същевременно позволяват мащабиране на биоотпечатаните тъкани, за да се осигурят потенциални решения. В бъдеще може да се очаква, че независимите изследвания върху материали и клетъчни биомастила за васкуларизация могат да отстъпят мястото на по-интегрирани и холистични подходи за разработване на биопринтери за синтез на васкуларизирана тъкан.

Други видове тъкани

Освен това, допълнително към описаните типове тъкани, някои учени работят и по биопринтиране на ретина и мозък, въпреки че тези изследвания все още са на много ранно фундаментално ниво. Приложен е пиезоелектричен мастиленоструен биопринт с помощта на ретинални ганглийни клетки (RGCs) и глия и е изследван ефектът на параметрите на процеса върху жизнеспособността на клетките и техните свойства, стимулиращи растежа. Наскоро беше представено и ръчно отлагане на първични кортикални неврони върху гелан-гума-RGD за производство на мозъчна тъкан. Въпреки че не е използвана компютърна система за управление, представената работа демонстрира за първи път използването на подхода слой по слой за инженерство на мозъчна тъкан.

Трансплантация и клинични изследвания

Регенеративната медицина е може би едно от най-вълнуващите бъдещи приложения на 3D биопринтирането. Учените се надяват, че биопринтирането може да се използва за директно отпечатване на тъкани като кожа и за създаване на органи и структури за трансплантация. Смята се, че този подход може да се приложи успешно за трансплантация и производство на многослойни типове тъкани като нерв, сърце, кръвоносен съд, кост и кожа (Фиг. 2). Изследователите предвиждат, че в бъдеще тъкани и евентуално цели органи могат да бъдат трансплантирани на пациенти, произведени от техните собствени клетки. С помощта на 3D биопринтиране, отхвърлянето на трансплантация и дългите списъци с донори могат да се превърнат в проблем от миналото. В допълнение, множество тъканни конструкции бяха биопринтирани и имплантирани подкожно, за да се оцени in vivo диференциацията на клетките и функционалността на имплантите. Въпреки тези експерименти, нито една от биоотпечатаните тъкани не е била клинично използвана за хора, тъй като все още не е предоставено одобрение. Няма установени разпоредби за биопринтери или продукти с биопечат. Въпреки това, в резултат на нарастващия интерес в световен мащаб и нововъзникващите фирми на пазара за биопринтиране, успехът на първата технология, преминала през различните етапи на одобрение, ще бъде пример за предходните технологии и продукти.

Въпреки че технологията за биопринт е все още в ранните си етапи на клинично приложение, 3D отпечатани пластмасови, керамични или метални импланти за заместване на костна тъкан вече са успешно трансплантирани на хора. В допълнение към постоянните импланти, скорошна работа, публикувана в New England Journal of Medicine, представи уникален случай на трансплантация на 3D отпечатана биорезорбируема шина за дихателни пътища на бебе. Не са наблюдавани неочаквани проблеми с шината и се очаква пълната резорбция на устройството да отнеме около 3 години. Този примерен случай за клинична употреба на 3D отпечатани скелета оптимистично се счита, че ще бъде началото на подобен успех в областта на биопечатни тъкани и органи. Въпреки постиженията в изследванията за биопринтиране, биопринтирането за трансплантация в болници изисква допълнителни подобрения. Органите и тъканите, които не се нуждаят от значителна васкуларизация (т.е. кожа и хрущял), се очаква да бъдат много скоро въведени в клиничната практика. Въпреки това, тъканите и органите, които са метаболитно активни (например сърце, панкреас и черен дроб) са изключително предизвикателство.

Фигура 2. 3D стратегия за биопринтиране

Един от аргументите за клиничния потенциал на биоотпечатаните тъкани и органи произлиза от самата технология за биопринтиране. То включва живи клетки в биомастило, като използването на специфични за пациента клетки е сравнително ново в тази технология. Стволовите клетки, като ембрионални стволови клетки и индуцирани плурипотентни стволови клетки, са потенциални неограничени източници на специфични за пациента клетки за производство на тъкани и органи. Специфичните за пациента клетки могат да бъдат диференцирани и след това биопринтирани или биопринтирани и след това диференцирани към множество линии, за да се конструират тъкани и органи, които ще причинят минимален риск от имуногенност.

Фармацевтика и високопроизводителен скрининг

Друга ключова област, в която се очаква да успее 3D биопринтирането, е разработването на лекарства. Повечето от тестовете за лекарства в момента се извършват чрез използване на 2D клетъчни култури. Подобно на изследването на рака, тези култури не симулират поведението на естествените клетки. За да се подпопомогне за решаването на този проблем, понастоящем се използва ксенографтирането (трансплантация на човешки клетки) на животни. Този подход обаче е предизвикателен поради биохимичните, метаболитните и генетичните различия между видовете. Предполага се, че тези проблеми са основната причина за високия процент на неуспех при оценката на новите кандидати за лекарства. Въпреки продължаващите усилия за подобряване на процеса на разработване на лекарства, само едно от 10 000 нови химични вещества и един от десет кандидати за лекарства влизат в клинични изпитвания, достигат окончателния етап на одобрение и навлизат на пазара. От друга страна, използването на 3D биопринтиране за фармацевтични тестове, а не in vivo проучвания, не се нуждае от регулаторно одобрение. По този начин производителността на разработването на лекарства вероятно ще бъде значително повишена. Сред различните методи за проектиране на 3D in vitro системи, биопринтът има сериозни предимства като контролируемост на размера и микроархитектурата, голям капацитет, възможност за съвместно култивиране и нисък риск от кръстосано замърсяване. Ето защо биоотпечатаните тъкани и органи все повече се разглеждат като потенциални модели, които да се използват в лекарствената токсикология и високопроизводителния скрининг.

Фокус в изграждането на тъканни модели за фармацевтиката са чернодробната и туморната тъкан. В това отношение е изследвано изработването на биоотпечатан модел на чернодробни микрооргани с цел проследяване метаболизма на различни лекарствени препарати (Фиг. 3). Биопринтираният 3D чернодробен микроорган е използван за симулация на физиологичен отговор на черен дроб при прилагане на лекарства и излагане на токсични химикали. Метаболизирането на такова лекарство е демонстрирано чрез трансформирането на нефлуоресцентното пролекарство, 7-етокси-4-трифлуорометил кумарин (EFC), в флуоресцентния метаболит 7-хидрокси-4-трифлуорометил кумарин (HFC). Използвани са епителни клетки и хепатоцити, капсулирани в Matrigel, за да се покаже пътя на дифундиране на лекарството от кръвния поток към тъканта. Епителните клетки са клетките, покриващи лумена, през който лекарствата преминават от кръвния поток към целта, а хепатоцитите са използвани като тип целеви клетки. Въз основа на представения тъканен модел е разработен изчислителен макромащабен модел с помощта на числена рамка за конвекция-дифузия-клетъчна кинетика. Доказано е, че така представения подход е много полезен за бъдещи изследвания в 3D микроорганната фармакокинетика и токсичност.

Фигура 3. Биопечатани тъканни модели за тестване на лекарства и високопроизводителен скрининг. (а) Биоотпечатна чернодробна тъкан. (b) биопринтирана бъбречна тъкан (c) биоотпечатна кожна тъкан (d) 3D биоотпечатан материал за възстановяване на костите (e) отпечатан хидрогел съдържащ клетки (f) многоклетъчни 3D биопринтирани конструкции на сърдечна тъкан

Развиващите се технологии за микроинженерство позволяват адаптивно производство на 3D клетъчни микрочипове, включително мека литография, повърхностни модели, микрофлуидни манипулации и биопринтиране. Сред тях, технологията за биопринт има предимството да създава ко-култури и едноклетъчни чипове с много прецизен контрол върху плътността на клетките. В резултат на неотдавнашно проучване, използващо нов метод, базиран на мастиленоструйно биопринтиране, бе разработена високопроизводителна миниатюрна платформа за скрининг на лекарства. Авторите отпечатват алгинат, натоварен с Escherichia coli, за да създадат биочипове върху покривни стъкла. Използвайки подхода слой по слой, капчици от три антибиотика са отпечатани върху клетките. Резултатите показват сходна клетъчна жизнеспособност, функционалност и антибактериални ефекти на антибиотиците в мастиленоструйно биопринтирани и микропипетирани проби. По този начин биопринтирането на високопроизводителни чипове с мастиленоструен биопечат се оказва ефективен метод за минимизиране на типичните тестове за скрининг на лекарства. Освен това бяха представени клетъчно-базирани биосензори (CBBs), където с помощта на акустично базиран биопринт е създаден микрочип от капчици на гладкомускулни клетки в колаген. След това биоотпечатаният микрочип е подложен на въздействието на различни условия на околната среда (например температура) и е оценен ефектът на приложените стимули, както и параметрите на процеса на биопечат върху жизнеспособността на клетките. В допълнение към 3D биопринтирането на високопроизводителни клетъчни микрочипове, контролираното доставяне на кандидати за лекарства в клетъчни микрочипове също е важен фактор за ефективен скрининг на лекарства. Предложени са различни подходи, включително моделиране на лекарства, запечатване на лекарства, аерозолни спрейове и микрофлуидно зареждане с лекарствени препарати.

Изследване на ракови заболявания

Огромните бъдещи възможности на технологията за 3D биопринтиране в областта на биомедицината вече са добре документирани. Една от областите, в които учените се надяват 3D биопринтирането да се окаже полезно, е изследването на рака. Туморната микросреда, както и биологичните структури и вещества, заобикалящи тумора, са съществени елементи на поведението на рака и все още не са напълно изяснени. Досега в тези изследвания са използвани животински модели и 2D клетъчни култури. Те обаче не демонстрират точно поведението на човешките ракови клетки in vivo, което включва сложно взаимодействие между туморните клетки както с клетъчната среда, така и с други клетки. Последните изследвания показват, че 3D моделите отразяват по-точно поведението на туморните клетки и биопринтирането е обещаваща техника, която може да бъде ефективна при подобни изследвания. Едно предимство, което притежава 3D биопринтирането, е, че клетките могат да бъдат изрично проектирани в 3D модел с неговите извънклетъчни и структурни елементи. Алтернативните подходи се различават по това, че изискват самостоятелно сглобяване, което отнема много повече време, или скеле, при което опорната матрица се разработва независимо от клетъчната култура. Освен това, 3D биопринтирането предоставя както възможност за отпечатване на определени тъканни и клетъчни структури, така и те да бъдат специфични за пациента. Клетките на пациента могат да бъдат биопсирани, култивирани и отпечатани в подходящи структури, след което да бъдат изследвани по отношение на лекарствен отговор или ефективна доза.

Въпреки това, използването на подхода за биопринтиране в изследванията на рака е ново и са проведени само няколко проучвания в тази нововъзникваща област на приложение. За първи път биопринтирането на туморна тъкан беше демонстрирано с клетки от човешки рак на яйчниците (OVCAR-5) и MRC-5 фибробласти. В това проучване е използвана мастиленоструйна платформа за биопринтиране с двойни ежектори. Предложеният подход не само представлява инструмент за изследване на рака, но предлага и страхотна платформа за високопроизводителен скрининг. Същите изследователи осъществяват биопринтиране на HeLa клетки, за да образуват модели на тумор на шийката на матката. Въпреки че тези две проучвания представляват биопроизводство на туморни сфероиди с помощта на технология за биопринтиране, изграждането на по-големи тъканни модели за изследване на миграцията и метастазите на раковите клетки също е от решаващо значение. Друг подход беше съсредоточен върху използването на базирана на лазер система за 3D биопринтиране на HeLa клетки и неракови 10 T1/2 фибробласти в PEGDA заедно с микроваскуларна мрежа с ширини на каналите от 25, 45 и 120 μm за симулиране на диаметъра на кръвоносните съдове . В допълнение към подходите, базирани на скелета, беше извършено и биопринтиране без скеле на модел на рак на гърдата с помощта на платформата NovoGen Bioprinting™. При този опит раковите клетки са заобиколени от физиологично релевантна стромална среда, включваща MSC-диференцирани мастни клетки, фибробласти на млечна жлеза и ендотелни клетки.

Заключителни бележки и бъдещи преспективи

Изследванията през последните години показаха, че 3D биопринтирането е нововъзникващ подход с широко приложение в различни области, включително основни изследвания в тъканното инженерство, регенеративната медицина, патогенезата на рака, тъканен биопринт за клинични трансплантации, както и може да се приложи успешно във фармацевтиката за тестване на лекарства и високо-производителен скрининг. В момента има около 15 различни вида тъкани, използвани в различни експериментални изследвания. Въпреки това, все още съществуват няколко човешки тъкани, които все още не са използвани. В тази връзка трябва да се направят бъдещи опити за биопринтиране на други модели на тъкани и органи, които са предизвикателство, но могат да революционизират медицината. Това зависи и от иновациите в областта на тъканното инженерство, тъй като тези изследвания жизнено зависят от нашето разбиране за неизследваните типове тъкани. Освен това едно от новите направления в биопринтирането трябва да се фокусира върху биопроизводството на нови видове органи, като бионични органи или органи, които не съществуват в природата.

По-голямата част от изследванията за 3D биопринтиране се развиват около хомоцелуларни тъканни модели, използващи един тип клетка. Въпреки това, нативните тъкани имат хетероклетъчна природа с множество типове клетки, организирани в изключително сложна анатомия. Въпреки че простите тъканни модели за биопринт са относително приемливи за фундаменталните изследвания, производството на функционална тъкан за клинични или фармацевтични проучвания изисква включване на множество типове клетки. По този начин част от функционалността на клетките може да бъде активирана или допълнително засилена от взаимодействията клетка-клетка. Следователно, биопринтирането на множество типове клетки се нуждае от допълнителни изследвания на оптималните условия за култивиране, включително правилната среда и реагенти, които да подпомогнат техния растеж и поведение.

Съвременните опити за прилагане на биопринтирането в трансплантационната медицина са ограничени главно до миши модели. Мичите модели обаче са малки с физиологични условия, които значително се различават от тези на хората. Например, панкреатична тъкан с 3D биопринтирани Лангерхансови острови може да бъде имплантирана в диабетен миши модел и да регулира секрецията на инсулин. От друга страна, средният обем на Лангерхансовите острови в панкреаса на мишка е приблизително 100 000 пъти по-малък от този в човешкия панкреас. Следователно мащабирането на процеса на биопринтиране на тъкани и органи е изключително важно за конструирането на клинично значими размери. По-големите животни, като свине, могат да бъдат преходна стъпка към изпитанията върху хора, тъй като те отговарят на човешката физиология по-точно от малките животни. За разширяване на биопринтираните органи за клинична употреба, производството на йерархични съдови мрежи е от решаващо значение в допълнение към тяхната механична здравина, еластичност и дългосрочна структурна стабилност. Освен това, интегрирането на нервните тъкани е критична стъпка към функционалното производство на тъкани и органи, тъй като тъкани като сърдечна, мускулна и кожна изискват инервация, което в момента е предизвикателство пред биопринтирането. По-голямата част от изследванията за биопечат включват използването на биомастила на базата на хидрогелове, тъй като те са благоприятна среда за 3D растежа на клетките. Въпреки това, хидрогеловете имат слаби механични свойства, когато се използват при ниски концентрации за подпомагане на клетъчната пролиферация. В допълнение, биоразградими материали като термопласмаси могат да се използват като фонова рамка за мащабиране на процесите за получаване на тъкани и органи. Наличните биоматериали, като синтетичните полимери, са здрави, но тяхното разграждане е трудно, отнема много време и не съвпада с процеса на регенерация на тъканите. Следователно разработването на нови биоматериали е жизненоважно за прогресията в биопринтирането на тъкани и органи за клинична употреба. Освен биоматериалите, изборът на правилния клетъчен източник също е критичен фактор за успешната клинична и фармацевтична употреба. За персонализираната медицина е предизвикателство да се получат различни първични типове клетки. Тъй като стволовите клетки представляват обещаващ източник на клетки, са необходими допълнителни изследвания за установяване на стандартни протоколи за диференциация на стволови клетки в различни стабилни и функционални клетъчни линии.

Друг известен начин за производство на тъкани за високопроизводителен скрининг са миниатюрните 3D – тъкан върху чип или орган върху чип. Комбинацията от технология за биопринтиране с други технологии като микрофлуидиката е от съществено значение за производството на физиологично симулирани, сложни и дългосрочно жизнеспособни чипове от целеви микрооргани. При биопринтиране на клетъчни микрочипове трябва да се насърчава прилагането на технологии, генериращи капчици с обем от пиколитри, с ниско ниво на увреждане на клетките и притежаващи възможности за сортиране на единични клетки. Трябва също да се разработят и приложат технологии за контролирано доставяне на лекарства върху клетъчните микрочипове.

Въпреки че са направени няколко опита за проектиране на ракова микросреда с помощта на технологията за биопринтиране, са необходими по-нататъшни изследвания за изграждане на физиологично релевантна цялостна микросреда, включваща туморно място, здраво място и микросъдова мрежа между тях, за извършване на изследване на процеса на метастазиране. Моделите на туморни тъкани трябва да бъдат точно поставени в биопринтирани васкуларизирани паренхимни тъкани, за да се изследва техният растеж, интравазация и екстравазация.

Тест: ОР2 Ниво за напреднали

Литература

  • AZoMaterials. 3D bioprinting and its applications (2018). https://www.azom.com/article.aspx?ArticleID=17370
  • Bhise NS et al. 2014. Organ-on-a-chip platforms for studying drug delivery systems. Journal of Controlled Release. doi:10.1016/j.jconrel.2014.05.004
  • Harris M. 2018. Print me an organ. https://physicsworld.com/a/print-me-an-organ/
  • Liang M, Yutong W, Li Y, et al. 2020. Current Advances on 3D-Bioprinted Liver Tissue Models. Adv. Healthcare Mat., doi: 10.1002/adhm.202001517
  • Murphy SV, Atala A. 2014. 3D bioprinting of tissues and organs. Nat. Biotechnol., 32: 773–785.Varotto A. 2015. Global Market for 3D Printing., BCC Research, ISBN: 1-62296 -006-8
  • Ozbolat IT, Peng W, Ozbolat V. 2016. Application areas of 3D bioprinting. Drug Discovery Today. doi:10.1016/j.drudis.2016.04.006
  • Park JY, Jang J, Kang HW. 2018. 3D Bioprinting and its application to organ-on-a-chip. Microelectron. Eng.. doi:10.1016/j.mee.2018.08.004
  • Wang C, et al. 2014. Three-dimensional in vitro cancer models: a short review. Biofabrication, doi: 10.1088/1758-5082/6/2/022001.
  • Yao R, et al. 2016. Three-dimensional printing: review of application in medicine and hepatic surgery. Cancer Biol Med
  • Grigoryan B, Paulsen S, Corbett D, et al. 2019. Functional intravascular topologies and multivascular networks within biocompatible hydrogels. Science, 464: 458-464.
  • Augustine R. 2018. Skin bioprinting: a novel approach for creating artificial skin from synthetic and natural building blocks. Prog Biomater., 7: 77–92.
  • Datta P, Ayanb B, Ozbolat IT. 2017. Bioprinting for vascular and vascularized tissue biofabrication. Acta Biomaterialia, 51: 1-20.
  • AZoMaterials. 3D bioprinting and its applications (2018). https://www.azom.com/article.aspx?ArticleID=17370
  • Bhise NS et al. 2014. Organ-on-a-chip platforms for studying drug delivery systems. Journal of Controlled Release. doi:10.1016/j.jconrel.2014.05.004
  • Harris M. 2018. Print me an organ. https://physicsworld.com/a/print-me-an-organ/
  • Liang M, Yutong W, Li Y, et al. 2020. Current Advances on 3D-Bioprinted Liver Tissue Models. Adv. Healthcare Mat., doi: 10.1002/adhm.202001517
  • Murphy SV, Atala A. 2014. 3D bioprinting of tissues and organs. Nat. Biotechnol., 32: 773–785.Varotto A. 2015. Global Market for 3D Printing., BCC Research, ISBN: 1-62296 -006-8
  • Ozbolat IT, Peng W, Ozbolat V. 2016. Application areas of 3D bioprinting. Drug Discovery Today. doi:10.1016/j.drudis.2016.04.006
  • Park JY, Jang J, Kang HW. 2018. 3D Bioprinting and its application to organ-on-a-chip. Microelectron. Eng.. doi:10.1016/j.mee.2018.08.004
  • Wang C, et al. 2014. Three-dimensional in vitro cancer models: a short review. Biofabrication, doi: 10.1088/1758-5082/6/2/022001.
  • Yao R, et al. 2016. Three-dimensional printing: review of application in medicine and hepatic surgery. Cancer Biol Med
  • Grigoryan B, Paulsen S, Corbett D, et al. 2019. Functional intravascular topologies and multivascular networks within biocompatible hydrogels. Science, 464: 458-464.
  • Augustine R. 2018. Skin bioprinting: a novel approach for creating artificial skin from synthetic and natural building blocks. Prog Biomater., 7: 77–92.
  • Datta P, Ayanb B, Ozbolat IT. 2017. Bioprinting for vascular and vascularized tissue biofabrication. Acta Biomaterialia, 51: 1-20.